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一种简单、快速的苏云金芽胞杆菌基因组DNA提取方法

张彦蕊;束长龙;宋福平;黄大昉;张杰;   

  1. 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室;中国农业科学院生物技术研究所;
  • 出版日期:2012-11-26 发布日期:2012-11-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(31171911);;

  • Published:2012-11-26 Online:2012-11-26

摘要: 从培养时间、裂解溶液、抽提和沉淀时间等方面对苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因组DNA提取技术进行改进。提取8株对蛴螬有杀虫活性的野生Bt菌株的基因组DNA,分析其纯度,并进行PCR分析与酶切分析。试验结果表明,新的提取方法耗时36 min,明显短于旧方法所用时间(97 min);两种方法提取的基因组DNA A260/A280均大于1.8,无明显区别;琼脂糖凝胶电泳结果显示,上样量相同时,新方法提取的基因组DNA浓度是旧方法的5倍以上;新方法提取的基因组DNA能作为模板灵敏地扩增出测试基因,所提取的DNA能被限制性内切酶完全酶切,证明DNA具有很高的纯度。本研究改进的基因组DNA提取方法耗时短、产量高,并能满足PCR扩增、酶切等分子生物学需要。

关键词: 苏云金芽胞杆菌, 基因组DNA, 提取, 纯度, PCR, 酶切