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小鼠TIE2基因启动子的克隆及转录活性分析

陆俊佳;袁志刚;许淑茹;廖明;赖青鸟;畅荣妮;袁广之;侯伟;舒伟;   

  1. 广西医科大学细胞生物学与遗传学教研室;
  • 出版日期:2012-11-26 发布日期:2012-11-26
  • 基金资助:
    广西自然科学基金项目(2010GXNSFA013155);;

  • Published:2012-11-26 Online:2012-11-26

摘要: 克隆小鼠TIE2基因的启动子并分析其转录活性。设计并合成引物,以小鼠肝脏组织DNA为模板,巢式PCR扩增小鼠TIE2基因启动子区。将扩增获得的系列截短片段克隆入荧光素酶(Luc)报告基因表达载体pGL3-Basic中,构建系列启动子区转录活性报告质粒pGL3-TIE2-Luc。报告质粒与内参质粒共转染SVEC4-10、NIH3T3、HUVEC及NIT-1细胞系,48 h后收获细胞检测双荧光素酶的表达情况。构建的pGL3-TIE2-Luc系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA测序分析都显示正确;转染4种细胞系后进行双荧光素酶活性检测的结果表明,TIE2基因启动子区域(-2056-+1)具有较强的转录活性。成功构建小鼠TIE2基因启动子报告质粒,证实TIE2基因上游区域(-2056-+1)具有较强的启动子活性。

关键词: TIE2, 启动子, 双荧光素酶活性检测