CP4-EPSPS 夹心ELISA 配对单克隆抗体的研制和生物学特性分析

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (4): 206-209.

CP4-EPSPS 夹心ELISA 配对单克隆抗体的研制和生物学特性分析

李忠鹏^1，2, 于寒松¹, 胡耀辉¹, 时圣凤^2，3, 刘蕴慧2，4 段永杰^1，2, 李小宇², 王永志², 李启云²

1. 吉林农业大学，长春 130118 ；
2. 吉林省农业科学院，长春 130033 ；
3. 东北农业大学，哈尔滨 150030 ；
4. 哈尔滨师范大学，哈尔滨 150025

收稿日期:2012-11-04 出版日期:2013-04-22 发布日期:2013-04-22
作者简介:李忠鹏，男，硕士，研究方向：食品生物化学；E-mail ：lizhongpeng1985@qq.com ；于寒松为并列第一作者
通讯作者介绍:李启云，男，博士，研究员，研究方向：植物保护，E-mail ：qyli1225@126.com ；王永志，男，博士，副研究员，研究方向：转基因植物检测，E-mail ：yzwang@cjaas.com ；胡耀辉，男，教授，学士，研究方向：功能性食品与生物反应器，E-mail ：huyaohui@vip.163.com
基金资助:
农业部转基因重大专项（2011ZX08004-004），中青年科技领军人才及优秀创新团队项目（20121812），吉林省农业微生物重点实验室平台建设项目（20122105）

Preparation and Analysis on Biological Characteristics of Monoclonal Antibodies Against CP4-EPSPS for Sandwich ELISA

Li Zhongpeng^1，2, Yu Hansong¹, Hu Yaohui¹, Shi Shengfeng^2，3, Liu Yunhui2，4 Duan Yongjie^1，2, Li Xiaoyu², Wang Yongzhi², Li Qiyun²

1. Jilin Agricultural University，Changchun 130118 ；
2. Jilin Academy of Agricultural Sciences，Changchun 130033 ；
3. Northeast Agricultural University，Harbin 150030 ；
4. Harbin Normal University，Harbin 150025

Received:2012-11-04 Published:2013-04-22 Online:2013-04-22

摘要/Abstract

摘要：

为获得能够用于夹心ELISA 检测的配对抗CP4-EPSPS 蛋白单克隆抗体，构建CP4-EPSPS 原核表达载体并转化大肠杆菌Rossetta，获得高效表达。通过对可溶性蛋白纯化，获得了高纯度目的蛋白。以纯化后的CP4-EPSPS 蛋白作为抗原免疫BALB/ c 小鼠，经过细胞融合和筛选获得2 株抗CP4-EPSPS 蛋白单克隆抗体（1A5 和8A3）。经鉴定，这2 株抗体可以有效地识别高温变性和天然CP4-EPSPS 蛋白；叠加ELISA 分析表明两株抗体识别的抗原表位不同，说明两株抗体能够用于夹心ELISA 检测CP4- EPSPS 蛋白。

关键词: CP4-EPSPS, 蛋白表达, 单克隆抗体, 夹心ELISA

Abstract:

In order to obtain specific monoclonal antibody against CP4-EPSPS protein for sandwich ELISA, the CP4-EPSPS gene was cloned into a bacterial expression vector and transformed into E.coli strain Rossetta. The target protein was expressed efficiently. After purification, the target protein was obtained. Purified CP4-EPSPS was used to immunize BALB/c mice and two monoclonal antibodies（1A5 and 8A3）were generated. These antibodies can recognize nature and denatured CP4-EPSPS. Overlay ELISA showed that they recognize different epitopes on CP4-EPSPS, so they can be used in sandwich ELISA to detect CP4-EPSPS.

Key words: CP4-EPSPS, Protein expression, Monoclonal antibody, Sandwich ELISA

李忠鹏, 于寒松, 胡耀辉, 时圣凤, 刘蕴慧, 段永杰, 李小宇, 王永志, 李启云. CP4-EPSPS 夹心ELISA 配对单克隆抗体的研制和生物学特性分析[J]. 生物技术通报, 2013, 0(4): 206-209.

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