生物技术通报

刘春, 曹丽敏, 周东升, 彭晚霞

2013, 0(4): 1-7.

摘要 ( 212 )

PDF (1446KB) ( 1104 )

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植物经常面临不利的生长条件，如干旱、盐分、寒冷、冰冻和高温。这些胁迫会延误生长和发育，降低生产率，在极端情况下甚至导致植物死亡。植物对胁迫的响应是动态的并涉及不同调控水平间的复杂交互应答，包括生理和形态学适应的基因表达和新陈代谢的调节。总结响应干旱、极端温度和盐分胁迫的代谢变化信息。

植物中响应茉莉素应答的顺式作用元件

黄诗玮马述田云卢向阳

2013, 0(4): 8-13.

摘要 ( 242 )

PDF (1261KB) ( 1295 )

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茉莉素是一类基本的植物激素，广泛存在于生物体内，它作为信号分子在植物的发育、衰老以及胁迫信号响应过程中发挥重要的作用。启动子是位于基因5' 端ATG 上游负责调控基因转录的一段DNA 序列。目前，已在植物启动子中鉴定出许多与诱导表达相关的顺式作用元件。着重介绍植物启动子中响应茉莉素应答的顺式作用元件的研究进展。

腺苷形成酶家族研究进展

李丽丽林双君

2013, 0(4): 14-20.

摘要 ( 293 )

PDF (1478KB) ( 1042 )

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ANL 腺苷形成酶家族（ANL Adenylating Enzymes）包含有酰基- 和芳香基-CoA 合成酶，荧光素酶和非核糖体肽合成酶中的腺苷功能域。这个家族酶催化两步反应：首先是羧酸底物腺苷化，形成酰基-AMP 中间产物；第二步为硫酯键的形成。随着大量的ANL 家族成员不断被鉴别，科学家们提出10 个保守的序列基序，它们被认为与酶催化活性相关。大量的晶体结构分析和动力学试验证明，在酶催化过程中，C 末端亚基的旋转发挥了重要的作用。这种旋转是ANL 家族酶重要的催化特点，其独特之处在于允许酶利用同样的活性位点表现出不同的构象并催化完全不同的两步反应。综述腺苷形成酶超家族的3 种酶系，并分别从研究历程、保守区域及反应过程中的酶构象动力学进行介绍。

锌对哺乳动物细胞损伤的保护机制

郑娟娟, 张雨, 许文涛, 黄昆仑

2013, 0(4): 21-26.

摘要 ( 199 )

PDF (1264KB) ( 863 )

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锌是人体最重要的营养类微量元素之一，是细胞内许多酶类的辅因子和大分子物质的结构组成和活性中心。主要介绍锌在抗氧化，维持DNA 稳定和调控细胞凋亡方面的重要作用，综述锌对一些毒性物质，如重金属，过氧化氢，酒精等造成的细胞损伤的保护作用。

rRNA 在水产动物细菌性病原鉴定中的应用

李莉, 谢旭阳, 曹延超, 闫丽娜

2013, 0(4): 27-32.

摘要 ( 214 )

PDF (1293KB) ( 1112 )

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细菌性疾病是水产养殖业最为常见且危害严重的一类疾病，病原菌的鉴定一直是人们关注的焦点。随着微生物核糖体RNA（rRNA）数据库的不断完善，rRNA 分析作为细菌分类的依据得到广泛认同，成为病原菌分类鉴定的常用工具。就rRNA 基因的特征、研究方法及在水产养殖病原菌检测中的应用作一概述，对应用中存在的问题进行分析。

嗜杀酵母的生物学功能及其应用

王祥红,贾仁洁,李静,池振明

2013, 0(4): 33-38.

摘要 ( 361 )

PDF (1238KB) ( 1372 )

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嗜杀酵母分泌的外毒素可以抑制或杀死敏感菌株，并且对自身分泌的嗜杀因子具有免疫性。将嗜杀酵母用于工业生产中，可以净化环境，提高产品的质量；一些海洋嗜杀酵母还可以用于海水养殖业，可以控制某些海洋酵母菌引起的海洋动物疾病。除此之外，嗜杀酵母分泌的毒素蛋白可以作为潜在的抗真菌药物，以便抵制某些病原酵母菌或类酵母菌等微生物引起的侵染。介绍嗜杀酵母的种类、作用机理，并且概述嗜杀酵母的应用及研究进展。

核酸适体的筛选制备及分析应用

刘腾飞, 杨代凤, 邓金花, 董明辉, 邓青青

2013, 0(4): 39-48.

摘要 ( 353 )

PDF (1496KB) ( 2511 )

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核酸适体（Aptamer）是通过配体指数富集系统进化技术（SELEX）在体外筛选得到的一小段寡核苷酸序列，它可以和不同的靶标，如小分子物质、蛋白质、药物及抗生素等进行高亲和力和高特异性的结合。由于靶分子范围广、相对稳定、易体外合成和修饰等特性，核酸适体在疾病检测、临床治疗、生化分析、药物研发等领域得到了广泛应用。以农药为靶标的核酸适体技术在农药残留检测中也得到了初步应用。总结相关文献，介绍核酸适体的发现、特点及其筛选方法的基本原理和筛选过程中的主要分离方法，列举核酸适体在农药、抗生素、金属离子、生物毒素、微生物以及蛋白质检测中的应用，并对核酸适体的检测应用进行展望。

纳米生物传感器在生物医药中的应用

顿文涛, 李勉, 李燕, 李聪, 赵仲麟,袁超

2013, 0(4): 49-54.

摘要 ( 254 )

PDF (1239KB) ( 1794 )

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纳米材料与生物感应元件结合用以选择性识别化学或生物学分子，加速了新型纳米生物传感器的发展。与传统的方法相比，纳米生物传感器具有多种优点，对人类将产生重要的影响。现在纳米生物传感器的发展趋势是微型化、灵敏化、可靠化，选择性的感应设备主要集中在纳米材料和生物分子的结合上用于检测广范围的分析物上。综述生物医疗中基于不同生物识别元件的纳米生物传感器应用以及该领域的近期发展。

盐芥EhKCR1 基因的克隆及表达分析

徐小静安会灵韦百阳周宜君冯金朝

2013, 0(4): 55-62.

摘要 ( 179 )

PDF (2469KB) ( 681 )

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以山东生态型盐芥（Eutrema halophilum）为试材，采用电子克隆及RT-PCR 的方法，从中获得一个β-酮脂酰-CoA 还原酶基因全长cDNA，命名为EhKCR1，GenBank 登录号为JQ389855。EhKCR1 cDNA 长1 152 bp，含954 bp 开放阅读框架，编码318 个氨基酸。采用生物信息学的手段对EhKCR1 蛋白的保守结构域、疏水性和二级结构等进行了分析。EhKCR1 蛋白具有 NADH 结合结构域［G（X）3GXG（X）3A（X）3A（X）2G］负责裂解的关键结构域［Y（X）3K］。序列比对和系统进化分析表明，盐芥EhKCR1 基因与来源于拟南芥和油菜的KCR1 亲缘关系最近，与单子叶植物来源的KCR1 亲缘关系较远。Real-time PCR 分析表明EhKCR1 受ABA 和干旱明显诱导。推测EhKCR1 与盐芥的抗逆有关。

紫花苜蓿组织培养体系的建立及其遗传转化

周晓馥吕杰苗璐高峰徐洪伟

2013, 0(4): 63-68.

摘要 ( 194 )

PDF (1543KB) ( 642 )

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为建立高效的农杆菌介导的紫花苜蓿的遗传转化体系，以紫花苜蓿无菌苗叶片作为外植体，用8 种含有不同激素浓度梯度的培养基对其进行愈伤组织及不定芽的诱导，结果表明，M7 培养基（MS+1 mg/L 2，4-D + 2 mg/L CH + 0.25 mg/L KT + 2 mg/L 琼脂）的愈伤组织诱导率最高，可达100% ；继代表现最好，为胚性愈伤组织；同时，继续培养后可直接分化出不定芽，分化率达100%。结果表明，最适宜条件分别为卡那霉素（Kan）筛选浓度为75 mg/L ；农杆菌菌液OD600 值为0.45-0.6 之间。

甘蓝型油菜下胚轴和带柄子叶再生体系研究

郝晓云, 沈海涛, 李鸿彬

2013, 0(4): 69-74.

摘要 ( 226 )

PDF (1376KB) ( 692 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

以甘蓝型油菜野油19 号的下胚轴和带柄子叶为外植体，研究其下胚轴和带柄子叶在不同浓度激素配比下的分化率及再生频率的变化。该品系的油菜下胚轴和带柄子叶在1.5 mg/L 的2，4-D 中预培养4 d 后，转入分化培养基中，其愈伤组织形成早，发生快，再生频率和分化频率均较高。其中，下胚轴转入MS+3 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA 培养基中的分化率和再生频率最高，再生频率达到86.67% ；带柄子叶外植体的再生频率要比下胚轴的再生频率低，在MS+4 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA 的分化培养基中芽的再生频率为46.67%。本研究初步建立了甘蓝型油菜野油19 号的高频率再生体系。

云南萝芙木pnae 基因全长克隆及其序列分析

郭川曹福祥刘继科冯延芝李猛

2013, 0(4): 75-80.

摘要 ( 211 )

PDF (2073KB) ( 623 )

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根据已知的其他物种PNAE 酶cDNA 序列设计引物，采用RT-PCR 技术从云南萝芙木叶片中扩增获得pnae 基因部分cDNA 序列即PNAE 酶基因中间大片段，再用RACE 技术获得其两端序列。序列拼接得到完整的1 004 bp 的PNAE 酶基因，根据获得的序列，分析得到795 bp 的开放阅读框，编码264 个氨基酸。序列分析显示，云南萝芙木中PNAE 酶氨基酸序列与蛇根木中的该酶氨基酸序列同源性高达90%，但和其他植物物种中的PNAE 酶氨基酸序列，以及其他物种间的PNAE 酶氨基酸序列同源性都不高，在40%-60% 之间，表明不同物种中PNAE 酶氨基酸序列不具有全序列的高度同源性。进一步序列分析发现，在各植物的PNAE 酶氨基酸序列中都存在两个高度保守的氨基酸区域，表明不同物种中PNAE 酶存在共同的高度保守区段。

RNA 编辑修复藻苔（Takakia lepidozioides）叶绿体accD 基因中的突变

万平

2013, 0(4): 81-84.

摘要 ( 200 )

PDF (1971KB) ( 697 )

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藻苔（Takakia lepidozioides）叶绿体基因组中存在着非常高的RNA 编辑频率，这种现象至今没有得到很好的解释。本研究采用比较基因组学方法，对小立碗藓（Physcomitrella patens）、青苔（Syntrichia ruralis）和藻苔3 种苔藓植物中accD 基因的 DNA 序列和基因编码的蛋白氨基酸序列进行比较分析。研究发现，经过RNA 编辑，藻苔的基因产物获得了与其同源基因相同的氨基酸序列。藻苔中高频发生的RNA 编辑是对基因组中DNA 突变的一种修复，提高了藻苔对强辐射环境的生存适应能力。

莱茵衣藻基因组文库的构建

王潮岗, 陈爱娜, 胡章立, 于珊珊

2013, 0(4): 85-89.

摘要 ( 197 )

PDF (1637KB) ( 1175 )

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以莱茵衣藻CC-849 为材料，提取基因组DNA，利用BamH Ⅰ和Bgl Ⅱ对基因组DNA 进行酶解，获得了可用于构建基因组文库的6-12 kb 的基因组片段，并浓缩至200 ng/μL。该片段与λDNA 载体连接，经噬菌体蛋白包装、侵染大肠杆菌XL1- blue 后，获得了莱茵衣藻基因组文库。该文库的滴度为2.12×10⁵ pfu/mL，共有转化子4.26×10⁴ 个，插入片段的平均长度约为9 kb，扩增后基因组文库滴度为9.5×10⁶ pfu/mL。

离子对高效液相色谱法分析黄瓜花叶病毒侵染烟草的总RNA 水平变化

乔文婕, 雷荣, 蒋弘山, 胡帆, 李志红, 朱水芳

2013, 0(4): 90-95.

摘要 ( 248 )

PDF (1785KB) ( 777 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

为研究植物病毒在RNA水平上对寄主植物的基因表达产生的影响，采用离子对高效液相色谱法，对黄瓜花叶病毒侵染烟草造成的总RNA 的组成成分变化进行研究。离子对液相色谱法，是近几年才应用于对RNA 进行分离、纯化和分析的一种试验技术，具有操作简单、重复性好、所需时间短等优点。选择适宜的离子对试剂，并对选定的离子对试剂正己胺/1，1，1，3，3，3- 六氟-2-丙醇进行了优化，达到了较好的总RNA 分离效果，并观察到健康植株和染病植株分离峰之间的差异，有差异的RNA 种类还需进一步试验来验证。为研究植物病毒的致病机制提供一种新的试验方法和途径。

尖孢镰刀菌辣椒专化型原生质体制备条件优化

弭宝彬, 张吉祥, 杨宇红, 茆振川

2013, 0(4): 96-100.

摘要 ( 218 )

PDF (1663KB) ( 1085 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

以尖孢镰刀菌辣椒专化型（Fusedum oxysporum f. sp. capsicum）为供试菌株，研究了其原生质体制备的最佳条件，明确了菌龄、酶的种类、酶解时间、酶解温度及转速等因素对原生质体制备的影响。结果表明，当利用孢子培养的14 h 的菌丝体以15 mg/mL 崩溃酶、0.7 mol/L 的NaCl 作为渗透压稳定剂，140 r/min，32℃酶解4 h时，可最大限度的收集原生质体，其在再生固体培养基SR 上再生率为32.3%。

复合木质纤维素酶菌株筛选及其培养条件优化

于俊杰, 赫荣琳, 武改红, 张粲, 陈树林, 张同存

2013, 0(4): 101-109.

摘要 ( 194 )

PDF (1874KB) ( 939 )

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通过富集培养、平板初筛、平板点接，从土壤中筛选得到一批产木质纤维素酶系较全的菌株，经摇瓶复筛验证确定26-6 为出发菌株。该菌经PDA 平板菌落形态观察、孢子扫描电镜观察以及ITS 序列片段分析，初步鉴定该菌为草酸青霉组菌株，并命名为Penicillium oxalicum EH26-6。随后对菌株的摇瓶发酵条件进行研究，最终确定了最佳产酶条件：玉米芯为碳源，玉米浆干粉为有机氮源，初始pH5.0，温度30℃，接种量10%。本研究为低成本生产复合纤维素酶系的生产提供一个备选菌株。

谷氨酸棒杆菌L-天冬氨酸α-脱羧酶基因的克隆及重组酶性质研究

石增秀崔文璟周丽周哲敏

2013, 0(4): 110-115.

摘要 ( 251 )

PDF (2096KB) ( 879 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

从谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum）中克隆得到L-天冬氨酸α-脱羧酶基因panD。将该基因连接到pET- 24a 载体上，并在Escherichia coli BL21（DE3）中实现了成功表达。蛋白电泳检测显示，PanD 自裂解后形成的α 亚基和β 亚基，即 PanD 重组酶具有自身加工功能。重组酶的比酶活高达2.60 U/mg（156 mmol/g?h）。酶学性质研究表明，其最适温度为55℃，最适 pH 为7.0。80℃条件下，PanD 的半衰期约为40 min。在37℃，pH7.5 条件下，K_m 值为4.26 mmol/L，V_max 为35.97 nmol/min，k_cat 为1.02/s，催化效率k_cat/K_m 为0.24 L/mmol?s。

溶藻弧菌HY9901 外膜蛋白OmpH 的基因克隆及其生物信息学分析

周泽军, 庞欢瑛, 丁燏, 简纪常, 吴灶和

2013, 0(4): 116-122.

摘要 ( 269 )

PDF (1877KB) ( 1624 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

根据已发表的溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）全基因组序列设计1 对特异性引物，PCR 扩增溶藻弧菌HY9901 株外膜蛋白OmpH 的全长基因。结果显示，该基因（GenBank 登录号：JX855924）全长573 bp，共编码190 个氨基酸残基。根据推导的氨基酸序列预测其分子量约为21.1 kD，等电点为9.02。SignalP 4.0、TMHMM Server 2.0 和SoftBerry-Psite 预测结果显示，OmpH 不存在信号肽与跨膜区，含有1 个N-糖基化位点，6 个磷酸化位点，1 个内质网靶信号位点以及3 个微体C 末端靶信号位点。利用MAGE5.0 软件，以邻位相连法构建OmpH 系统进化树，结果显示，溶藻弧菌OmpH 与副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、哈氏弧菌（Vibrio harveyi）等有较近亲缘关系。采用多种参数成功预测了OmpH 可能的B 细胞抗原优势表位，分别是第5-10、106- 110、120-125、158-163 和175-180 区段。利用SWISS-MODEL 软件，模拟了OmpH 亚基三维结构模型，且与其同源蛋白大肠杆菌（Escherichia coli）Skp 蛋白有相似构型。

大肠杆菌sdaA、sdaB、pgpB 基因的敲除及其对磷脂酰丝氨酸合成的影响

佟新伟杨泓喆李玉路福平

2013, 0(4): 123-128.

摘要 ( 245 )

PDF (1881KB) ( 1021 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

利用Red 同源重组技术敲除大肠杆菌sdaA、sdaB 和pgpB 基因，阻断大肠杆菌磷脂酰丝氨酸合成途径中的底物L-丝氨酸和磷酸乙醇酸的部分分解代谢，以达到提高磷脂酰丝氨酸在菌体内含量的目的。将出发菌株和重组菌株进行摇瓶发酵，发酵1 000 min 后，采用高效液相色谱法分析磷脂酰丝氨酸的产量。试验结果表明sdaA、sdaB、pgpB 基因敲除后，磷脂酰丝氨酸在菌体总磷脂中的含量提高了一倍多，说明通过基因工程手段改变大肠杆菌中磷脂酰丝氨酸合成的部分代谢途径，初步获得磷脂酰丝氨酸产量提高的菌株，具有较好的应用前景。

毕赤酵母新启动子GCW14 在细胞表面展示CALB 中的应用

张轩薇叶燕锐刘晓肖鲁柳柳林影

2013, 0(4): 129-135.

摘要 ( 293 )

PDF (2047KB) ( 1213 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

以毕赤酵母内源壁蛋白G_cw14_p 为锚定蛋白，分别以新的内源组成型启动子P_GCW14 与诱导型启动子P_AOX1、组成型启动子P_GAP 和P_TEF14 种启动子将南极假丝酵母脂肪酶B（CALB）展示于毕赤酵母细胞表面，通过检测4 种重组细胞的CALB 酶活比较这4 个启动子在毕赤酵母中的转录活性。结果显示，P_GCW14 的启动子活性与P_AOX1 相当，最高菌体酶活力分别在发酵48 h 和168 h 时达到694.8 U/g（Dry cell weight）和684.3 U/g（Dry cell weight），以P_GCW14 为启动子的重组菌产酶周期大大缩短；组成型启动子 P_GAP 和P_TEF1 的最高菌体酶活分别在发酵24 h 和168 h 达到266.7 U/g（Dry cell weight）和449.2 U/g（Dry cell weight），可见_PGCW14 的启动子活力性要高于P_GAP 和P_TEF1。此外，以P_GCW14 为启动子，利用壁蛋白G_cw14p 自身的信号肽代替载体上的α-信号肽使重组菌的菌体酶活力提高了约4%。

重组牛乳源金黄色葡萄球菌黏附因子FnbpA A 功能区的表达与鉴定

苏艳, 王世民, 李莹, 韦海娜, 邵俊高, 张宝江, 殷涛

2013, 0(4): 136-139.

摘要 ( 242 )

PDF (2345KB) ( 484 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

黏附素分子FnbpA（纤连蛋白结合蛋白A，fibronectin binding protein A）是金黄色葡萄球菌感染早期最重要的致病因子，也是一个重要的免疫靶标。由于不同地区流行的菌株产生的黏附素有一定的差异，将分离自新疆地区奶牛乳源金黄色葡萄球菌黏附素分子FnbpA 的A 功能区亚克隆至pGEX 原核表达载体并转入BL21 中诱导表达，SDS-PAGE 分析表明，切除GST 标签后在63 kD 处出现特异性条带。纯化切除GST 标签的蛋白经弗氏佐剂乳化免疫试验兔。ELISA 方法检测免疫兔的抗体效价并评估抗体和葡萄球菌结合能力，结果表明，目的蛋白的抗体效价可达6.7×10⁶，并可在体外识别菌体抗原。

溶杆菌属Lysobacter yanansis sp. nov. 胞内外蛋白双向电泳条件优化及图谱建立

王斐斐武坤毅郭玲崔浪军任靖

2013, 0(4): 140-146.

摘要 ( 273 )

PDF (1881KB) ( 627 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

通过对溶杆菌属细菌Lysobacter yanansis sp. nov. 胞外蛋白上样量和聚焦程序两个方面进行双向凝胶电泳条件的优化，分析了其对溶杆菌Lysobacter yanansis sp. nov. 胞外分泌蛋白的双向凝胶电泳图谱的影响。结果表明，150 μg 的上样量和聚焦程序Ⅱ 获得的双向电泳图谱蛋白点数较多且清晰。同时，建立了溶杆菌属细菌Lysobacter yanansis sp. nov. 胞外和胞内蛋白双向电泳图谱，经过硝酸银染色和PDQuest 图像分析检测到了100 种胞外蛋白和204 种胞内蛋白。

抗生素高产炭样小单孢菌的热诱变育种

李瑾黄运红李鹿鸣彭伟梦龙中儿

2013, 0(4): 147-151.

摘要 ( 177 )

PDF (1763KB) ( 582 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

采用热诱变处理，结合庆大霉素抗性筛选法筛选，对产抗生素的炭样小单孢菌JXNU-1 进行选育，最终获得抗生素高产菌株JXNU-1-16-R4。结果显示，其抗生素产率比出发菌株提高了98.53%。

PCR-DGGE法研究新型氧肥对水淹胁迫下土壤细菌多样性的影响

王静何钢王蕾杜琳倩

2013, 0(4): 152-157.

摘要 ( 189 )

PDF (1599KB) ( 500 )

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以短埂大参土壤为研究对象，以水淹为胁迫因子，将短埂大参土壤进行A ：单一水淹处理，B ：水淹施加新型氧肥处理，C ：正常浇水不施加新型氧肥处理，处理时间为36 d。对各处理第6、12、18、24、30、36 天土壤中细菌16S rDNA 基因的 PCR 扩增产物进行DGGE 分析。结果表明，同时期的A 处理与B 处理样品的DGGE 条带相似度随处理时间延长，相似度降低，B 处理的第12、18、24 天样品的DGGE 条带数比A 多且较亮；B 处理的香农- 威纳指数（Shannon 指数）比A 处理的Shannon 指数高，差值呈“低-高-低”的趋势；同时期的B 处理与C 处理样品DGGE 条带相似度较低；各处理在各检测时间内多样性表现不同， A 样品土壤细菌多样性在各检测时间的相似度普遍较低，B 样品土壤细菌多样性在各检测时间的相似度较高且较稳定，C 样品土壤细菌多样性在各检测时间的相似度较低。说明新型氧肥对水淹胁迫下土壤细菌多样性影响较显著。

两株藏南地区土壤根瘤菌分类地位的确定

单辉辉李正韩素贞

2013, 0(4): 158-166.

摘要 ( 212 )

PDF (1532KB) ( 734 )

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通过多相分类技术对分离自藏南地区土壤的两株根瘤菌进行了分类地位的确定。两株菌CNU8561007 与 CNU85000012 均为革兰氏阴性、好氧的杆状细菌。通过表型特征分析发现二者在多项生理指标上表现一致，由于两菌株来源于不同的地理位置，二者在表型特征上也存在少许差异。经过比较16S rDNA 序列发现，两供试菌株的序列相似性为100%，并且与 Rhizobum yanglingense，R.loessense，R.mongolense，R.gallicum 表现出了极高的相似性，4 种看家基因atpD，recA，glnII 和danK 的系统发育分析与16S rDNA 序列分析的结果相吻合，一致显示与两供试菌株遗传距离最近的模式种为Rhizobum yanglingense，通过 DNA 同源性分析和DNA G+C mol% 测定，最终将这两菌株归入到Rhizobum yanglingense 中，两菌株在BOX 指纹图谱上的差异表明了它们为同种内的不同菌株。

孜然油对几种果蔬贮藏致病菌抑制作用分析

聂莹, 李淑英, 齐小雨, 杨帆, 木泰华, 唐选明

2013, 0(4): 167-171.

摘要 ( 191 )

PDF (2469KB) ( 966 )

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运用水蒸汽法从孜然籽中提取孜然油，得率为2.7%。气质联用- 色谱法（GC-MS）分析孜然油中含有13 种成分，含量最高的为枯茗醇与一种未知结构的混合物，含量为42.86% ；其次为枯茗醛，含量为27.66%。孜然油对晚疫病菌、扩展青霉、匍枝根霉、茄腐镰刀菌均具有明显的抑制作用，最小抑菌浓度依次为0.4‰、0.6‰、0.3‰、0.3‰。孜然油可抑制扩展青霉和匍枝根霉的孢子萌发，最小抑制浓度分别为0.16‰、0.8‰。孜然油较强的抑菌活性为其在果蔬储藏保鲜中开发新型植物源抑菌杀菌剂奠定基础。

三种油气指示菌定量PCR方法的建立及其在油气田土壤中的初步应用

邵明瑞, 许科伟, 汤玉平, 赵克斌, 符波, 刘和

2013, 0(4): 172-178.

摘要 ( 342 )

PDF (2083KB) ( 988 )

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利用建立的pmoA、bmoX 和alkB 基因的定量PCR 方法分别研究了油田和气田土壤中甲烷氧化菌、丁烷氧化菌和中链烷烃氧化菌的数量丰度，并以背景区土壤作为对照。pmoA 和alkB 的基因数量均随着采样深度的增加而降低了1-2 个数量级。手工法提取油气田土壤DNA 进行油气指示菌基因定量的结果显示，油田区和气田区土壤中pmoA 和alkB 基因丰度略高于背景区样品。气田区样品的bmoX 基因丰度为2.75×10⁵ 拷贝数/g，高于背景区和油田区土壤样品0.5-1 个数量级。试剂盒提取的土壤DNA 的基因定量结果表明，油田区样品pmoA 和alkB 基因丰度分别为3.09×10⁴ 和2.56×10⁶ 拷贝数/g，高于气田区和背景区土壤样品，且气田区样品bmoX 基因丰度分别高于背景区和油田区样品1 个数量级和0.5个数量级。结果表明3种油气指示菌的定量PCR 技术的建立可为油气微生物勘探提供新的检测手段。

日本蟾蜍MCL-1 cDNA的克隆及生物信息学分析

张姝芳袁进强黄慧诸葛慧徐跃杨仙玉

2013, 0(4): 179-184.

摘要 ( 221 )

PDF (1733KB) ( 605 )

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克隆日本蟾蜍（Bufo japonicus formosus）髓细胞白血病基因-1（myeloid cell leukemia-1，mcl-1），并进行序列分析。通过菌落PCR 对日本蟾蜍皮肤cDNA 质粒文库筛选获得目的基因。运用生物信息学方法对该基因进行分析，预测其编码蛋白的结构和功能。序列分析表明mcl-1 基因（GenBank 登录号为JX219482）的cDNA 全长为1 090 bp，5' 端和3' 端非翻译区域分别为19 bp 和432 bp，ORF 由639 个碱基组成，编码由212 个氨基酸残基组成的蛋白质。经氨基酸序列同源性比对发现，日本蟾蜍与非洲爪蟾（Xenopus laevis）的同源性为60%，与其他7 种动物的同源性在38%-55% 之间。MCL-1 氨基酸序列构建的进化树与传统动物分类学相符。日本蟾蜍MCL-1 与人类同源蛋白具有相似的结构特征，对其cDNA 序列的进一步分析，将为研究其生物学功能和药物研发奠定基础。

碳酸盐碱度胁迫下鲤鱼氨排泄相关基因的差异表达

赵兰, 徐鹏, 孙效文

2013, 0(4): 185-193.

摘要 ( 206 )

PDF (1952KB) ( 1105 )

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鲤鱼（Cyprinus carpio）是我国主要淡水养殖鱼类之一，且具有一定的盐碱耐受性，可以在偏碱水体中存活生长。为了了解其对不同碱度的耐受性，以及在碱胁迫环境下的基因表达变化，以鲤鱼为试验材料，使用一定pH 值不同碳酸盐碱度水对其进行胁迫试验。选取鱼类氨排泄相关的候选基因，包括Rhesus 血型相关糖蛋白基因（Rhesus blood group-associated glycoprotein， Rh），水通道蛋白基因（Aquaporin，AQP），催乳素基因（Prolactin，PRL），碳酸酐酶基因（Carbonic Anhydrase，CA），Na⁺/K⁺ 转运 ATP 酶基因（Na⁺/K⁺ transporting ATPase，NKA），钠氢交换体基因（sodium hydrogen exchanger，NHE）采用定量PCR 方法检测其在不同碱度下的基因表达情况。结果表明上述基因随着碱度的升高在鳃、肠和肾3 个组织中的总体表达水平较淡水对照显著升高，说明鲤鱼在碳酸盐碱胁迫条件下与氨排泄相关基因的表达上调。这些基因具有一定的空间表达差异性，具体结果为：胁迫过程中主要在鳃中表达的基因为AQP3A、PRLRA、NHE7，在肾中表达的基因为PRL，在肠中表达的基因是RHAG、RHBG2、RHCG1。这些基因在碱胁迫环境下的表达变化为解析鱼类体内渗透压调节调控机制具有重要意义。

草鱼IgM 的纯化、标记及检测方法的建立

田园园叶星张莉莉

2013, 0(4): 194-200.

摘要 ( 246 )

PDF (1450KB) ( 860 )

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通过Protein A 亲和层析法分离纯化草鱼血清中的免疫球蛋白IgM，SDS-PAGE 检测产物的纯度及分子量，用纯化产物免疫兔制备多克隆抗体，并用辣根过氧化物酶标记此兔抗草鱼IgM 抗体，用于检测经草鱼出血病病毒广东株（GCRV-GD108）衣壳蛋白VP4 及VP5 免疫草鱼后产生的抗体水平。结果表明，纯化后的草鱼IgM 轻链及重链分子量分别在25 kD 和75 kD 左右，所制备的草鱼标记抗体可应用于草鱼血清IgM 水平的快速检测。建立了标记抗体检测草鱼抗血清的方法，为进一步研究病原体入侵感染机制、草鱼的免疫防御机理和疫苗效果评价等提供便捷的血清学检测方法。

LOH12CR1 互作蛋白GPS2 的筛选及鉴定

王永俊, 王迎伟, 施小六, 林若蘅, 张文婷, 沈宏伟1

2013, 0(4): 201-205.

摘要 ( 215 )

PDF (1669KB) ( 699 )

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12 号染色体短臂杂合子缺失的现象存在于多种血液科肿瘤和实体瘤患者中，提示此区域中可能存在抑瘤基因， LOH12CR1 是此区域中已鉴定的基因之一。为探讨LOH12CR1 的生物学功能，首先采取酵母双杂交系统筛查其互作蛋白，鉴定到转录调控因子GPS2 是其互作蛋白。进一步在HEK293 细胞中运用免疫共沉淀方法证实GPS2 与LOH12CR1 在体内存在相互作用；免疫荧光共定位结果显示GPS2 与LOH12CR1 在细胞核内存在共定位信号。

CP4-EPSPS 夹心ELISA 配对单克隆抗体的研制和生物学特性分析

李忠鹏, 于寒松, 胡耀辉, 时圣凤, 刘蕴慧, 段永杰, 李小宇, 王永志, 李启云

2013, 0(4): 206-209.

摘要 ( 262 )

PDF (1738KB) ( 1028 )

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为获得能够用于夹心ELISA 检测的配对抗CP4-EPSPS 蛋白单克隆抗体，构建CP4-EPSPS 原核表达载体并转化大肠杆菌Rossetta，获得高效表达。通过对可溶性蛋白纯化，获得了高纯度目的蛋白。以纯化后的CP4-EPSPS 蛋白作为抗原免疫BALB/ c 小鼠，经过细胞融合和筛选获得2 株抗CP4-EPSPS 蛋白单克隆抗体（1A5 和8A3）。经鉴定，这2 株抗体可以有效地识别高温变性和天然CP4-EPSPS 蛋白；叠加ELISA 分析表明两株抗体识别的抗原表位不同，说明两株抗体能够用于夹心ELISA 检测CP4- EPSPS 蛋白。

融合蛋白LL-37-haFGF 的复性及纯化条件研究

沈娟, 金小宝, 丁静, 朱家勇

2013, 0(4): 210-214.

摘要 ( 193 )

PDF (1963KB) ( 859 )

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首次设计开发一种促愈合，抗细菌感染的多肽分子——人源抗菌肽LL-37 修饰haFGF 的融合蛋白，旨在探讨此新型融合蛋白LL-37-haFGF 的复性及纯化条件。利用重组大肠杆菌表达LL-37-haFGF 并鉴定，初步考察8 种复性添加小分子对其包涵体复性的作用，经分析表明，添加0.3 mol/L 精氨酸可以大大提高LL-37-haFGF 的复性效率。经镍亲和色谱及CM 阳离子色谱纯化获得纯品。本研究获得了5.9 mg 纯度为95.43% 的LL-37-haFGF 目的蛋白，为研究其功能奠定了基础，也为类似的双功能多肽的制备提供了参考依据。

基于LAPS 系统的蛋白芯片表面修饰技术的对比研究

周爽, 贾芸芳, 孙晓轩, 邢克礼

2013, 0(4): 215-220.

摘要 ( 225 )

PDF (2278KB) ( 1097 )

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采用3-氨基丙基-三甲氧基硅烷（（3-aminopropy1）trimethoxysilane，APTES）和戊二醛（glutaraldehyde，GA）、左旋多巴（L-DOPA）修饰芯片载体表面，对两种不同修饰方法制备的蛋白质芯片进行对比研究。以XPS 检测表面活化剂的修饰效果；将AFP 抗体固定在修饰后的片基上，加入AFP 溶液，以蛋白探针的反应性作为监测指标，通过LPAS 系统检测反应产生的光电流。结果显示，左旋多巴修饰硅片对蛋白固定效果较好，有较高的反应活性，检测范围较宽，但幅值较小。

一种基于汞特异性DNA 和SYBR GREEN I 荧光检测Hg²⁺方法的建立

吴继魁, 卫碧文, 林莉, 毛芳, 周冬香, 熊振海

2013, 0(4): 221-224.

摘要 ( 181 )

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以富含胸腺嘧啶（thymine）的Hg²⁺ 特异性DNA 为识别元件，利用SYBR GREEN I 分子光“开关”的特性，建立了一种高灵敏、高选择性荧光均相检测Hg²⁺ 的新方法。该检测体系由两条非标记、含有5 个thymine-thymine（T-T）错配碱基对的 DNA 探针组成。T-T 错配使两条DNA 探针以单链形式存在于溶液中，而 Hg²⁺ 通过T-Hg²⁺-T 配位作用可以与两条DNA 探针结合并形成稳定的双链结构。在优化条件下，荧光强度与Hg²⁺ 浓度在0-100 nmol/L 范围呈线性，检测限为2 nmol/L（S/N=3），而其他金属离子也不会对Hg²⁺ 检测造成干扰。该方法简单快速，有望应用于水体中Hg²⁺ 的检测。

从生物产业发展十年探讨生物科技发展趋势

刘显胜郭继卫罗旭

2013, 0(4): 225-228.

摘要 ( 181 )

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生物产业在21 世纪头十年的发展既是起步的十年，更是关键的十年，既为生物科技在21 世纪的全面发展开个好头，也为生物科技在21 世纪的全面爆发式发展打下优厚的基础。从21 世纪头十年生物产业的研发投入与产出角度出发，浅析生物科技在未来一段时间的发展趋势，探析生物产业发展带来的生物科技竞赛、生物经济、生物安全防御和生物制高点等问题。

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