广藿香FPPS重组蛋白表达及互作蛋白筛选分析

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0475

生物技术通报 ›› 2019, Vol. 35 ›› Issue (12): 10-15.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0475

广藿香FPPS重组蛋白表达及互作蛋白筛选分析

钟李婷, 陈秀珍, 唐云, 李俊仁, 王小兵, 刘彦婷, 周璇璇, 詹若挺, 陈立凯

广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心岭南中药资源教育部重点实验室（广州中医药大学）国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室,广州 510006

收稿日期:2019-05-30 出版日期:2019-12-26 发布日期:2019-12-03
作者简介:钟李婷,女,硕士研究生,研究方向：植物遗传与调控;E-mail：13726857667@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（81803657）,广东省教育厅青年创新人才类项目（2017KQNCX039）,广东省中医药局科技项目（20181075）,广东省教育厅重点提升平台建设项目—岭南中药资源教育部重点实验室（2014KTSPT016）

Expression of FPPS Recombinant Protein from Pogostemon cablin and Screening of the Interaction Proteins

ZHONG Li-ting, CHEN Xiu-zhen, TANG Yun, LI Jun-ren, WANG Xiao-bing, LIU Yan-ting, ZHOU Xuan-xuan, ZHAN Ruo-ting, CHEN Li-kai

Research Center of Chinese Herbal Resource Science and Engineering,Guangzhou University of Chinese Medicine/Key Laboratory of Chinese Medicinal Resource from Lingnan（Guangzhou University of Chinese Medicine）/Ministry of Education,Guangzhou 510006

Received:2019-05-30 Published:2019-12-26 Online:2019-12-03

摘要/Abstract

摘要： 对广藿香的法尼基焦磷酸酶（PatFPPS）进行重组蛋白的原核表达,并筛选与之互相作用的蛋白。利用PCR扩增PatFPPS编码区并连接到pGEX-6P-1表达载体,测序验证后将质粒转化BL21（DE3）表达菌株,并用IPTG诱导表达蛋白,最终得到带有GST标签的PatFPPS融合蛋白。利用GST Pull-Down技术,将GST-PatFPPS融合蛋白分别与广藿香叶片总蛋白进行体外孵育,洗脱得到蛋白复合物,经SDS-PAGE及LC-MS/MS鉴定。结果表明,PatFPPS原核表达体系成功建立,获得纯化重组蛋白,并且筛选得到一些候选PatFPPS互作蛋白。利用优化的原核表达体系,可获得可溶性的PatFPPS蛋白,并鉴定得到与之互作的候选蛋白。

关键词: 广藿香, 蛋白表达, 广藿香醇, 互作蛋白, 茉莉酸甲酯

Abstract: The purpose of this study is to express the recombinant protein of farnesyl pyrophosphatase synthase（PatFPPS）of Pogostemon cablin in prokaryotic cells and to screen its interaction proteins. The PatFPPS CDS was amplified and ligated into the pGEX-6P-1 vector by PCR. The plasmid confirmed by sequencing was obtained and transformed into BL21（DE3）expression strain,which was then induced by IPTG and the GST-tagged PatFPPS fusion protein was acquired. With GST Pull-Down technique,GST-tagged PatFPPS fusion protein was incubated with total proteins from the P. cablin leaves in vitro. The solution containing the protein complex was eluted and then identified by SDS-PAGE and LC-MS/MS. The results showed that the prokaryotic expression system of PatFPPS was successfully established and the purified recombinant protein was obtained,and some candidate interaction proteins were screened. In conclusion,soluble PatFPPS protein can be obtained with optimized prokaryotic expression system,and candidate proteins interacted with PatFPPS are identified.

Key words: Pogostemon cablin, protein expression, patchouli alcohol, interaction protein, methyl jasmonate

钟李婷, 陈秀珍, 唐云, 李俊仁, 王小兵, 刘彦婷, 周璇璇, 詹若挺, 陈立凯. 广藿香FPPS重组蛋白表达及互作蛋白筛选分析[J]. 生物技术通报, 2019, 35(12): 10-15.

ZHONG Li-ting, CHEN Xiu-zhen, TANG Yun, LI Jun-ren, WANG Xiao-bing, LIU Yan-ting, ZHOU Xuan-xuan, ZHAN Ruo-ting, CHEN Li-kai. Expression of FPPS Recombinant Protein from Pogostemon cablin and Screening of the Interaction Proteins[J]. Biotechnology Bulletin, 2019, 35(12): 10-15.

参考文献

[1] Hu LF, Li SP, Cao H, et al.GC-MS fingerprint of Pogostemon cablin in China[J]. J Pharm Biomed Anal, 2006, 42(2):200-206.
[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(第一部)[M]. 北京:中国医药科技出版社, 2015:236.
[3] 蒋玲, 谷巍, 等. 濒危药用植物茅苍术法呢基焦磷酸合酶基因克隆及其表达分析[J]. 中草药, 2017, 48(4):760-766.
[4] 刘信丹, 张英, 吴孟华, 等. 广藿香醇合成酶基因Pc-PTS_1的克隆和生物信息学分析[J]. 中药材, 2018, 41(2):292-298.
[5] 何梦玲, 何芳, 熊洋, 等. 茉莉酸甲酯对广藿香叶中百秋里醇含量的影响[J]. 北方园艺, 2014(5):147-150.
[6] 张盼盼, 闫慧, 袁业锋, 等. GST pull-down联合质谱筛选(肌)营养不良短小蛋白结合蛋白1在小鼠睾丸组织中的相互作用蛋白质[J]. 中国生物化学与分子生物学报, 2017, 33(3):286-293.
[7] 赵文, 王静, 李伟滔, 等. 应用GST pull-down技术筛选水稻抗稻瘟病蛋白PID3互作蛋白的研究[J]. 植物病理学报, 2015, 45(5):476-485.
[8] 许惠滨, 徐倩, 连玲, 等. 杂交水稻恢复系福恢7185 OsSDR1基因的克隆与序列分析[J]. 福建农业学报, 2017, 32(9):939-945.
[9] Sandes SS, Zucchi MI, Pinheiro JB, et al.Molecular characteriza-tion of patchouli(Pogostemon spp)germplasm[J]. Genetics and Molecular Research, 2016, 15(1).
[10] 林彦君, 许莉, 陈佳江, 等. 川藿香与广藿香挥发油化学成分GC-MS对比分析[J]. 中国实验方剂学杂志, 2013, 19(20):100-102.
[11] Akiyama T, Pillai MA.Cloning, characterization and expression of OsGLN2, a rice endo-1, 3-beta-glucanase gene regulated developmentally in flowers and hormonally in germinating seeds[J]. Planta, 2004, 220(1):129-139.
[12] 程磊. 海芋FLORICAULA/LEAFY第二内含子序列克隆及系统发育分析[C]. 中国生态学会. 生态学与全面·协调·可持续发展——中国生态学会第七届全国会员代表大会论文摘要荟萃. 中国生态学学会, 2004.
[13] 马月萍, 戴思兰, 方晓华, 等. 甘菊中FLORICAULA/LEAFY同源基因DFL的基因组序列(登录号:AY672542)(英文)[J]. 分子植物育种, 2005(2):293-294.
[14] Janda M, Matoušková J, Burketová L.Interconnection between actin cytoskeleton and plant defense signaling[J]. Plant Signaling & Behavior, 2014, 9(11):e976486.
[15] Liu X.Photosynthetic acclimation to high temperatures associated with heat tolerance in creeping bentgrass[J]. Journal of Plant Physiology, 2008, 165(18):1947-1953.
[16] Galka MM, Rajagopalan N, Buhrow LM, etal. Identification of inte-ractions between abscisic acid and ribulose-1, 5-bisphosphate car-boxylase/oxygenase[J]. PLoS One, 2015, 10(7):e0133033.
[17] Tung SA, Smeeton R, White CA, et al.Over-expression of LeNCED1 in tomato(Solanum lycopersicum L.)with the rbcS3C promoter allows recovery of lines that accumulate very high levels of abscisic acid and exhibit severe phenotypes[J]. Plant Cell Environ, 2008, 31:968-981.
[18] Sun X, Wang Y.Transcriptional regulation of bHLH during plant response to stress[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2018, 503(2):397-401.
[19] 李欣, 李影, 曲子越, 等. bHLH转录因子在茉莉酸信号诱导植物次生产物合成中的作用及分子机制[J]. 植物生理学报, 2017, 53(1):1-8.
[20] 张凯伦, 罗祖良, 郭玉华, 等. bHLH转录因子调控药用植物萜类化合物生物合成的研究进展[J]. 中国现代中药, 2017, 19(1):142-147.

广藿香FPPS重组蛋白表达及互作蛋白筛选分析

Expression of FPPS Recombinant Protein from Pogostemon cablin and Screening of the Interaction Proteins

PDF (PC)

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	温晓蕾, 李建嫄, 李娜, 张娜, 杨文香. 小麦叶锈菌与小麦互作的酵母双杂交cDNA文库构建与应用[J]. 生物技术通报, 2023, 39(9): 136-146.
[2]	王艺清, 王涛, 韦朝领, 戴浩民, 曹士先, 孙威江, 曾雯. 茶树SMAS基因家族的鉴定及互作分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(4): 246-258.
[3]	王海龙, 李雨倩, 王勃, 邢国芳, 张杰伟. 谷子SiMAPK3基因的克隆和表达特性分析[J]. 生物技术通报, 2023, 39(3): 123-132.
[4]	王涛, 漆思雨, 韦朝领, 王艺清, 戴浩民, 周喆, 曹士先, 曾雯, 孙威江. CsPPR和CsCPN60-like在茶树白化叶片中的表达分析及互作蛋白验证[J]. 生物技术通报, 2023, 39(3): 218-231.
[5]	蔡佳, 梁振宇, 黄瑜, 鲁义善, 施钢, 简纪常. 利用酵母双杂交系统筛选与鉴定石斑鱼EcBAG3互作因子[J]. 生物技术通报, 2022, 38(8): 77-83.
[6]	杨佳慧, 孙玉萍, 陆雅宁, 刘欢, 卢存福, 陈玉珍. 拟南芥AtTERT对大肠杆菌非生物胁迫抗性的影响[J]. 生物技术通报, 2022, 38(2): 1-9.
[7]	范晨龙, 丁燏. 溶藻弧菌去乙酰化酶基因cobB克隆及其功能验证[J]. 生物技术通报, 2021, 37(8): 195-202.
[8]	张婵, 姚广龙, 张军锋, 于靖, 杨东梅, 陈萍, 吴友根. 广藿香百秋李醇分子调控及合成生物学研究进展[J]. 生物技术通报, 2021, 37(8): 55-64.
[9]	刘娟, 朱春晓, 肖雪琼, 莫陈汨, 王高峰, 肖炎农. 淡紫紫孢菌亲环蛋白PlCYP6 互作蛋白的筛选[J]. 生物技术通报, 2021, 37(7): 137-145.
[10]	杨华杰, 周玉萍, 范甜, 吕天晓, 谢楚萍, 田长恩. 拟南芥IQM4互作蛋白的筛选和鉴定[J]. 生物技术通报, 2021, 37(11): 190-196.
[11]	杨世全, 彭丹, 费文杰, 杨丰, 屈高毅, 唐威威, 欧剑萍, 邓湘雯, 周波. 杉木ClKptA/Tpt1基因的克隆及其表达特性分析[J]. 生物技术通报, 2020, 36(8): 15-22.
[12]	闵琪, 高子涵, 姚银, 张华山, 熊海容, 张莉. 共表达HAC1和分子伴侣基因对甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响[J]. 生物技术通报, 2020, 36(5): 159-168.
[13]	郝小花, 戴佳利, 暨文劲, 黄丹, 李东屏, 田连福. 水稻籽粒低镉蛋白LCD互作蛋白的筛选与鉴定[J]. 生物技术通报, 2020, 36(11): 21-29.
[14]	贾建磊, 陈倩, 靳继鹏, 袁赞, 张利平. 绵羊BMPR1B基因真核表达及产物互作蛋白的鉴定[J]. 生物技术通报, 2019, 35(12): 94-104.
[15]	熊丙全, 刘冬青, 廖相建, 郑雪莲. 茉莉酸甲酯对丹参毛状根有效成分含量的影响[J]. 生物技术通报, 2018, 34(7): 81-84.