生物技术通报

付宇;戴绍军;陈刚;周卫东;孙国荣;

2009, 0(08): 1-5.

摘要 ( 102 )

PDF (347KB) ( 504 )

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盐胁迫是限制植物生长发育的主要因素之一,植物Na+/H+反向转运蛋白可通过将Na+逆向转运出细胞外或将Na+区隔化于液泡中来抵制环境中过高的Na+浓度。植物中Na+/H+反向转运蛋白存在于细胞质膜和液泡膜上,现在已得到多种编码这些Na+/H+反向转运蛋白的基因,对其结构功能特性进行了大量研究,并发现将这些基因转入非抗盐植物中过量表达可提高转基因植物的抗盐性。概述了Na+/H+反向转运蛋白及其编码基因的最新研究进展。

植物RNAi的特点及其应用研究进展

白描;杨国顺;陈石;张美玲;

2009, 0(08): 6-10.

摘要 ( 71 )

PDF (246KB) ( 646 )

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RNAi是真核生物中普遍存在的抵抗病毒复制表达、抑制转座子转座及调控基因表达的监控机制。清楚植物体内的RNAi途径,将对认识植物基因组功能和转基因研究工作具有积极意义。就国内外与植物RNAi有关的研究作了综述,重点介绍了植物RNAi特征和该技术在植物基因工程中的应用。

植物小RNAs的研究进展

谢兆辉;

2009, 0(08): 11-17.

摘要 ( 65 )

PDF (478KB) ( 520 )

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小RNAs(长度小于40nt)是nc-RNAs重要的一部分,现在植物中已发现了多种小RNAs,如小干扰RNAs(siRNAs)、微小RNAs(miRNAs)、反式作用的小干扰RNAs、天然反义转录小干扰RNAs、异染色质小干扰RNAs、长小片段小干扰RNAs、天然反义转录的微小RNAs及其一些未命名的小RNAs。成熟的小RNAs聚集相关的蛋白质因子,可以抑制转录,导致转录水平的基因沉默(TGS);或介导目标mRNA的剪切,抑制翻译,导致转录后水平基因沉默(PTGS)。就这些植物小RNAs产生及其作用的研究进展作一概述

植物丙酮酸磷酸双激酶的分子生物学和基因工程研究进展

张桂芳;王金明;赵明;丁在松;

2009, 0(08): 18-21.

摘要 ( 93 )

PDF (200KB) ( 550 )

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丙酮酸磷酸双激酶是C4光合途径中的专一性酶,在C4光合作用中起着重要作用。综述了植物丙酮酸磷酸双激酶基因结构、基因进化、表达调控机理,概述了植物丙酮酸磷酸双激酶基因工程在植物光合生理方面的研究进展。

基因工程制药的研究现状与发展前景

汤娇雯;

2009, 0(08): 22-27.

摘要 ( 236 )

PDF (303KB) ( 789 )

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简要叙述了近年来基因工程技术在医药工业中的应用进展,主要包括基因工程技术在药物生产、新药开发及药物生产工艺改进的应用。随着基因组和蛋白质组研究的深入,基因工程药物将有更多的机会获得突破性进展。

阳离子脂质体在转基因畜禽中的应用

张鑫;苗向阳;李军训;曲朝杰;

2009, 0(08): 28-31.

摘要 ( 70 )

PDF (201KB) ( 333 )

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脂质体是由可生物降解的磷脂组成的双分子层结构,与生物膜有较大的相似性和组织相容性。阳离子脂质体作为一种新型的基因转移载体,以其生产简便、毒性低、无感染危险等优点在转基因领域越来越受到研究人员的青睐。随着转基因动物研究的不断深入,阳离子脂质体更是成为当今各种转基因方法中首选的非病毒类外源基因载体,在保护外源基因和提高其转染效率方面都发挥着重要作用。就阳离子脂质体的结构形式、介导基因转移的机制及其目前在转基因畜禽领域中的研究进展做一综述。

Ras蛋白信号途径及其对线虫生长发育的调控作用

张玉;茆振川;谢丙炎;冯东昕;

2009, 0(08): 32-37.

摘要 ( 165 )

PDF (316KB) ( 558 )

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Ras蛋白是一个分子质量为21kD左右的单体GTP酶,具有两种构象:GTP结合构象(Ras.GTP)及GDP结合构象(Ras.GDP),这两种构象在一定条件下可发生互变。由生长因子介导的Ras信号传导途径是诸多信号途径中与细胞增殖、分化密切相关的重要信号途径。受体型TPK/Ras/MAPK信号转导途径是是目前研究的最为清楚的受Ras蛋白调节的信号传导途径,该途径包括受体型酪氨酸蛋白激酶(RTK)、接头蛋白、鸟苷酸释放因子(GNEF)、Ras蛋白以及MAPK级联反应体系。目前,TPK/Ras/MAPK信号转导途径在秀丽杆线虫(Caenorhabolitis elegans中研究的最为清楚:Ras信号途径对于许多发育进程是必需的,包括阴门、子宫、交合刺、P12以及排泄管细胞的诱导分化;控制着性肌原细胞迁移、轴突导向;对细胞减数分裂粗线期具有促进作用。对C.elegans的研究加深了对TPK/Ras/MAPK信号途径结构、突变体表型以及与其他信号途径的互作的了解,将会促进Ras信号途径对植物寄生线虫调控作用的研究。

拟南芥中绿色荧光蛋白技术的改进及其意义

许守明;杨蓓;

2009, 0(08): 37-37.

摘要 ( 89 )

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海胆Runx基因的研究进展

葛辉;仇雪梅;常亚青;王秀利;

2009, 0(08): 38-40.

摘要 ( 91 )

PDF (181KB) ( 493 )

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海胆Runx(Runt box)基因是Runx基因家族的成员之一,在海胆的胚胎发育、细胞的增殖和分化过程中起重要的作用。海胆Runx基因表达的缺失或下调,将会影响其它相关基因的表达,进而影响胚胎的正常发育。综述了海胆Runx基因的研究进展。

纳豆激酶的研究现状与展望

逯京华;孙智杰;

2009, 0(08): 41-45.

摘要 ( 205 )

PDF (233KB) ( 1170 )

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纳豆激酶是从日本传统食品纳豆中提取的一种枯草杆菌蛋白酶,具有高效的抗血栓作用。与其他传统溶栓剂相比,纳豆激酶具有安全性好、成本低、易被人体吸收、作用直接迅速、作用持续时间长等优点,因此极有可能开发为新一代的溶栓剂。概括了纳豆激酶的分子结构、理化性质、溶栓作用机理、活性检测方法,介绍了其分子生物学研究进展,并对其开发应用进行了展望,证明纳豆激酶具有广阔的市场应用前景。

光合细菌叶绿素代谢研究进展

李尽哲;陈国平;胡宗利;王万能;

2009, 0(08): 46-49.

摘要 ( 139 )

PDF (261KB) ( 1201 )

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细菌叶绿素和捕光蛋白及类胡萝卜素一起组成色素蛋白复合物,进而构成完整的捕光单位进行光合作用。简述了细菌叶绿素合成途径及其中关键的酶,并从分子水平上介绍了细菌叶绿素合成相关基因的表达调控的研究进展。

转基因作物安全性的解决方法研究进展

王艳辉;张晓东;

2009, 0(08): 50-55.

摘要 ( 109 )

PDF (173KB) ( 569 )

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随着转基因技术的不断发展,转基因作物的种植面积逐年扩大。转基因技术在解决全球不断增长的粮食需求和保障农业的可持续发展等方面发挥了重要作用。然而,人们对转基因作物和转基因食品的安全性一直存在争议。为了解决这个问题,科学家研究出了多项分子技术来消除转基因带来的潜在威胁,尤其是近几年出现的"外源基因清除技术",有望成为解决该问题的有力工具。综述了几种解决转基因作物安全性问题的方法及其最新进展,并对几种方法进行了优缺点分析。

mRNA差别显示技术研究进展及其在水稻中的应用

唐江云;张涛;郑家奎;

2009, 0(08): 56-59.

摘要 ( 74 )

PDF (202KB) ( 771 )

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随着基因组计划的顺利实施,大量的生物信息被解析,分离和鉴定差异表达基因已成为分子生物学研究的热点。mRNA差别显示技术(DDRT-PCR)是目前有效筛选、分离差异表达基因的方法之一。就DDRT-PCR的基本原理、存在的问题及相应的改进方法作了简要概述。阐明了该技术在水稻生长发育、杂种优势、抗逆性基因研究中的应用、取得的成绩,最后对该技术在水稻突变体及抗药性上的应用前景做了有益探讨。

Real-time PCR技术的应用研究进展

李珊珊;王加启;李旦;董晓丽;赵圣国;卜登攀;

2009, 0(08): 60-62.

摘要 ( 124 )

PDF (167KB) ( 789 )

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Real-time PCR(RT-PCR)是基于PCR,利用不同的荧光检测定量核酸的技术,广泛应用于基因分型,单核苷酸多态性,等位基因突变检测等方面。综述了RT-PCR作为一种检测技术,在医学、食品、环境微生物等不同领域的应用进展。

酵母表面展示技术在蛋白质工程中的应用

张伟;郭钦;阮辉;张洪波;何国庆;

2009, 0(08): 63-66.

摘要 ( 129 )

PDF (202KB) ( 1153 )

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酵母细胞表面展示技术目前已成为蛋白质工程研究的重要工具,利用此技术可以鉴定蛋白间的相互作用、提高蛋白的亲和力和特异性、增加蛋白的稳定性和表达水平、绘制功能性抗原位图、固定化表达具有生物活性的蛋白和酶等,此项技术的运用代表着蛋白质工程研究中的最新进展。

显性核不育亚麻可育、不育花蕾mRNA差异表达研究及差异片段分析

斯钦巴特尔;李强;张辉;哈斯阿古拉;贾霄云;高凤云;

2009, 0(08): 67-70.

摘要 ( 75 )

PDF (344KB) ( 297 )

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利用mRNA差异显示技术,以显性雄性核不育亚麻不育系分离出的可育株和不育株为材料,对可育、不育花蕾中基因差异性表达进行了研究。对回收的差异片段进行反向Northern杂交验证,获得了7个阳性差异表达基因片段,并对它们进行测序和BLAST分析,最后确定了3个候选基因片段G-E07-100、G-E07-830和G-E07-330。序列分析结果表明:G-E07-100与蓖麻(Ricinus communis)的GTP-结合蛋白基因部分序列高度(90%)同源;G-E07-830与梨(Pyrus pyrifolia)的β-木糖苷酶基因高度同源(80%),并且还包含1个糖基水解酶家族C-末端的保守结构域;G-E07-330与亚麻(Linum usitatissimum)LuP12025D10 cDNA高度(89%)同源。进一步的Northern杂交结果表明3个候选基因均在不育花蕾中表达。

石斛兰dfr基因植物表达载体的构建

潘丽晶;范干群;张妙彬;肖杨;曹友培;

2009, 0(08): 71-75.

摘要 ( 65 )

PDF (408KB) ( 421 )

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石斛兰花瓣缺乏橙色、蓝色,这与其二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)活性有着密切的关系。根据已报道的石斛兰dfr基因序列设计引物,从Den.Burana Emerald中分离了dfr基因。将该基因序列正向与反向连接到植物表达载体pCAM BIA1301中,并由组成型启动子CaMV35S驱动,成功构建了dfr基因的正义和反义植物表达载体pC-SDN1和pCSDN2,并导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefacien)EHA105,以期利用转基因技术培育出石斛兰花色新品种。

大黄鱼ubc9基因的克隆和组织表达

周鹏;张子平;王艺磊;谢芳靖;邹志华;

2009, 0(08): 76-82.

摘要 ( 96 )

PDF (1055KB) ( 337 )

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类泛素化(sumoylation)是一种重要的转录后修饰过程。激活的SUMO(small ubiquitin-related modifer)和E2结合酶结合稳定后共价结合到底物上,从而完成对底物的类泛素化。UBC9(ubiquitin-conjugating enzyme)作为惟一的E2结合酶,在完成类泛素化中起着重要作用。从已构建的大黄鱼性腺线性化cDNA文库中筛选出ubc9同源片段,用SMART-RACE方法克隆得到了846bp的全长cDNA序列。该序列编码一个由158个氨基酸组成的蛋白。该蛋白序列与已知的UBC9高度同源,含UBC保守结构域和UBC9激活位点区域。实时定量PCR分析ubc9基因在各组织器官的表达,结果发现,ubc9基因在大黄鱼的性腺中大量表达。推测UBC9在大黄鱼性腺发育中起重要的生物学作用。

五个家系吉富罗非鱼的遗传多样性分析

陈文华;李建林;徐跑;俞菊华;唐永凯;

2009, 0(08): 83-87.

摘要 ( 75 )

PDF (461KB) ( 282 )

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吉富罗非鱼是用家系选育方法获得的优良品系。该方法可避免近亲交配引起的衰退。从罗非鱼的第二代遗传图谱上选取10个微卫星标记,对吉富罗非鱼5个家系共121尾鱼进行遗传多样性分析。结果表明:各位点的等位基因数为2～6个,平均等位基因数为4;有效等位基因数1.3920～3.6689,平均有效等位基因数为2.4733;平均杂合度观测值0.5984,平均杂合度期望值0.5642。5个家系的多态信息含量从小到大以依次为22家系、25家系、59家系、49家系、31家系,均为中度多态性。家系间基因分化系数(GST)为0.1676,各家系之间存在一定遗传分化。根据遗传距离采用UPGMA法对5个家系进行聚类,49家系和59家系遗传距离最小聚为一类,它们与31家系遗传距离最远。对10个微卫星位点的基因型进行分析,结果发现在GM578位点,22家系呈其他几个家系没有的BB基因型,有望成为22家系的标记。

来源于大肠杆菌的6-磷酸己酮糖合成酶和6-磷酸果糖异构酶的原核表达与活性测定

马莉;陈丽梅;年洪娟;

2009, 0(08): 88-93.

摘要 ( 110 )

PDF (730KB) ( 290 )

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同源性搜索显示大肠杆菌中存在核酮糖单磷酸途径关键酶6-磷酸己酮糖合成酶(HPS)和6-磷酸果糖异构酶(PHI)基因的同源序列,但没有其相关活性和功能方面的报道。本研究利用PCR方法从大肠杆菌的基因组中扩增hps和phi的同源序列(分别简称为Ehps和Ephi),构建了大肠杆菌Ehps和Ephi基因的原核表达载体pDEST17-Ehps和pDEST17-Ephi,表达和纯化了重组蛋白EHPS和EPHI,酶活性检测结果表明EHPS和EPHI具有活性。

炭疽菌保护性抗原受体结合区的表达及其多克隆抗体的制备

邱炎;王艳春;展德文;陶好霞;姜娜;韩秀萍;李家奎;刘纯杰;

2009, 0(08): 94-98.

摘要 ( 72 )

PDF (450KB) ( 306 )

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原核表达炭疽杆菌保护性抗原受体结合区并制备该蛋白的多克隆抗体。从炭疽芽胞杆菌A16R中经PCR扩增得到了炭疽菌保护性抗原(PA)受体结合区基因,即PA的第四结构域(PA-D4),将其克隆至含有6×His编码序列的原核表达载体pET-2b(+)中,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行蛋白表达;用HiTrapTM Chelating HP柱纯化重组蛋白,Western blot进一步鉴定;以纯化后的蛋白为抗原,免疫新西兰大耳白兔制备该蛋白的多克隆抗体;用ELISA和Western blot检测抗血清。结果表明,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,纯化后纯度可达90%以上;制备了针对PA-D4融合蛋白的高效价抗血清,ELISA抗体滴度为1∶102400;其抗体能特异性识别内源性的PA。PA-D4重组蛋白及其多克隆抗体的获得,为后续研究其功能和炭疽疫苗免疫保护机制奠定了基础。

酿酒酵母ATP合酶δ亚基融合蛋白的构建、表达及生物学功能分析

于立权;闫智慧;蒋伶活;

2009, 0(08): 99-103.

摘要 ( 92 )

PDF (342KB) ( 297 )

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利用分子克隆手段构建了酿酒酵母ATP合酶δ亚基和流感病毒血凝素(haemagglutinin,HA)标签融合蛋白的表达质粒。该融合蛋白在酿酒酵母细胞中能够正常表达,而且能够互补编码δ亚基的ATP16基因缺失株在利用非发酵性碳源方面的表型缺陷,表明该融合蛋白具有野生型δ亚基的功能。同时,构建了在大肠杆菌细胞中表达该δ亚基的ScAtp16p-His6融合蛋白,并用纯化的融合蛋白在家兔中制备了其多抗血清。结果表明此多抗可以很好地与ScAtp16p-His6和HA-ScAtp16p两种融合蛋白特异性结合。这些研究材料的获得为深入研究ATP合酶的解偶联机制和磷酸化调控机理奠定了基础。

产3-羟基丙酸重组菌的构建及其转化甘油的研究

张晓梅;诸葛斌;许正宏;窦文芳;黄瑞;许赣荣;

2009, 0(08): 104-108.

摘要 ( 75 )

PDF (441KB) ( 465 )

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将连接编码甘油脱水酶的基因重组质粒pEtac-dhaB和连接编码乙醛脱氢酶编码基因aldh的重组质粒pUCtac共转化大肠杆菌,得到产3-羟基丙酸重组大肠杆菌JM109(pUCtac-aldh,pEtac-dhaB),并对影响该重组菌发酵的营养因子进行研究。试验结果表明:该重组菌转化甘油合成3-羟基丙酸的适宜培养基组成为甘油40g/L、酵母膏6g/L、维生素B120.02g/L以及KH2PO47.5g/L;3-羟基丙酸产量和转化率分别达到4.92g/L和12.3%。

重组人乙酰胆碱受体原核表达条件的优化及初步应用

陈利春;汪凌云;孙玉秀;陈兵;徐从贞;鲁云霞;

2009, 0(08): 109-113.

摘要 ( 64 )

PDF (542KB) ( 420 )

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在已建立的重组人乙酰胆碱受体表达质粒的基础上进一步优化试验条件,初步应用于ELISA分析实验性重症肌无力模型(EAMG)中抗体的滴度。取构建好的pET28a(+)-hAChRα1-210经小规模诱导,确定IPTG诱导的最佳浓度为0.006mmol/L,最佳时间为5h,最佳温度为37℃;大规模诱导培养后离心,超声得到菌体沉淀,1mol/L尿素洗涤后8mol/L尿素溶解,过Ni2+亲和层析柱,紫外吸收及Folin酚法确定表达量较多而蛋白最纯的4℃透析过夜,PEG8000浓缩后免疫雌性近交系Lewis鼠构建EAMG,ELISA检测分析模型大鼠血清中抗体的效价。结果表明,制备了大量较纯的rhAChR,并成功应用于ELISA法分析EAMG模型中抗体的滴度。因此,获得的纯化rhAChR可用于构建EAMG模型及鉴定。

本刊启事

本刊编辑部;

2009, 0(08): 113-113.

摘要 ( 66 )

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毕赤酵母工程菌人hepcidin的纯化及部分铁代谢活性研究

崔丽文;袁其朋;李文进;

2009, 0(08): 114-117.

摘要 ( 68 )

PDF (314KB) ( 305 )

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采用摇瓶培养重组毕赤酵母(Pichia pastoris)表达并分泌重组人hepcidin至胞外,经等电沉淀,凝胶过滤纯化,电泳检测样品纯度,通过Western blot检测小鼠内皮细胞中hepcidin对GFP-FPN1及TfR1表达的影响。研究发现发酵hepcidin产量达150mg/L,纯化后经Tricine-SDS-PAGE检测为单一条带,分子质量与理论质量一致,具有抗菌活性,转染内皮细胞证实重组hepcidin可影响内皮细胞GFP-FPN1及TfR1的表达,具有调节铁代谢活性,对研究hepcidin与铁代谢的相关分子吸收机制及药物开发应用奠定了基础,对潜在的医学诊断治疗具有重要意义。

重叠PCR法合成轮状病毒抗原基因VP4

冉丹霞;王荣荣;郝亚宁;宋方洲;马永平;

2009, 0(08): 118-119.

摘要 ( 95 )

PDF (258KB) ( 1027 )

相关文章 | 计量指标

用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得轮状病毒VP4基因。根据Genbank中鼠VP4基因的序列设计34对引物,用overlap PCR法合成VP4全基因的两个片段A、B,将A、B分别连入pMD19-T simple载体,测序结果显示,成功合成了VP4全基因。证明了重叠延伸PCR法是获得目的基因的有效方法。

HBV前S1蛋白与HepG2细胞膜蛋白结合位点鉴定

丁岗强;张君;杨凤;杨健;唐霓;黄爱龙;

2009, 0(08): 120-124.

摘要 ( 78 )

PDF (353KB) ( 418 )

相关文章 | 计量指标

为鉴定HepG2细胞膜蛋白识别HBV包膜蛋白preS1区的位点。通过删除突变的方法构建preS1的不同区域片段与GST融合的重组表达质粒,将表达质粒转入E.coli BL21菌株中原核表达,以生物素标记HepG2细胞膜蛋白,pull down试验分析HepG2细胞膜蛋白识别preS1的位点。结果表明,21～33位氨基酸是HepG2细胞膜蛋白识别preS1的主要位点。通过对HepG2细胞膜蛋白与preS1结合的位点的分析,为进一步研究preS1在HBV早期感染中的作用和HBV包膜蛋白受体打下基础。

胆管癌胆汁蛋白质样品制备和双向电泳条件的优化

吕济相;王济明;罗诗樵;黄国飞;

2009, 0(08): 125-127.

摘要 ( 71 )

PDF (316KB) ( 387 )

相关文章 | 计量指标

采用合适的裂解液和沉淀方法,提取胆管癌胆汁中的蛋白质,获得分辨率高、重复性好的蛋白质双向电泳图谱。通过不同裂解液和蛋白质沉淀方法提取胆汁蛋白的效果比较,设计了不同的样品制备方法,并且对双向电泳(2-DE)的条件进行优化。结果显示,试验确定了适合胆管癌胆汁的裂解液配方(LSⅣ),丙酮沉淀的蛋白分布完整,沉淀效率相对较高。高伏时、长时间的等电聚焦可以获得高分辨率、重复性好的蛋白质双向电泳图谱。因此,本方法可以应用到胆管癌胆汁蛋白的提取,也可以对其他体液蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴。

白藜芦醇靶点蛋白质的研究

冯磊;花慧;邱丽颖;金坚;

2009, 0(08): 128-133.

摘要 ( 106 )

PDF (893KB) ( 483 )

相关文章 | 计量指标

为探讨白藜芦醇在肿瘤细胞中的结合靶点蛋白质。采用亲和甄别磁珠法生物淘洗白藜芦醇的靶点蛋白质。在构建并优化了白藜芦醇结构模型的基础上,通过分子动力学优化分析白藜芦醇与其靶点蛋白质的结构模型,并且使用分子对接分析验证两者的结合作用。结果表明,亲和甄X别磁珠法直接筛选到的能与白藜芦醇的特异性结合的蛋白质是Myosin蛋白质和Actin蛋白质,并且成功构建得到了合理的白藜芦醇分子与Actin蛋白质的复合物的三维结构。通过分析白藜芦醇分子与Ac-tin蛋白活性氨基酸残基结合模式发现,残基Val30,Phe31,Pro32,Thr203,Ala204,Glu205,Pro243,Asp244,等对两者的结合都有重要贡献。白藜芦醇是通过作用于肿瘤细胞的骨架结构蛋白来干扰细胞的有丝分裂过程,从而导致肿瘤细胞的体外增殖受到抑制。

药物筛选生物技术与抗细胞凋亡PI3K信号传导路径

吴超;曾(杰)邦哲;

2009, 0(08): 134-138.

摘要 ( 79 )

PDF (394KB) ( 290 )

相关文章 | 计量指标

细胞信号传导PI3K-Akt路径涉及细胞周期、再生、分化、衰老与凋亡的调控,采用高通量生物技术分析基因表达谱可用于抗肿瘤或抗衰老的基因与药物筛选。化学诱变剂甲磺酸乙酯(ethlmethane sulformate,EMS)处理CHO细胞,筛选到抗10μM、20μM浓度lovastatin的E10、E20突变细胞系,将E10细胞再经诱变剂EMS处理,筛选到抗70μM浓度lovastatin的ZE70细胞系。Igf-2刺激基因突变的肌肉萎缩小鼠肌肉细胞系,Western免疫杂交试验结果显示,PI3K-Akt路径的Akt蛋白质磷酸化功能正常。生长因子Igf-2刺激肌肉细胞系C2C12的cDNA基因芯片实验表明,促细胞再生、分化相关的基因表达上调,细胞凋亡相关的基因表达下调。细胞的基因突变,激素、Igf-2等生长因子刺激,往往是肿瘤发生的病因;但是,Igf-2等可用于抗肌肉萎缩疾病,以及抗细胞凋亡与衰老的药物筛选。

土壤中脂肪酶产生菌的筛选、鉴定及脂肪酶基因的克隆

玄国营;陈芳;李予霞;高剑峰;

2009, 0(08): 139-143.

摘要 ( 97 )

PDF (690KB) ( 546 )

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以橄榄油为惟一碳源进行富集培养、以罗丹明B为指示剂的平板进行初筛,摇瓶复筛得到产脂肪酶菌株;利用滴定法、平板扩散法以及转酯反应试验,最终筛选出具有较高转酯活性脂肪酶的菌株B2。通过对B2进行形态学观察,生理生化测定以及16S rDNA特征片段比较分析,初步确定B2为克雷伯氏菌属(Klebsiella sp.)。通过特定引物PCR扩增得到B2菌株两个脂肪酶基因K1和K2。利用丙酮法和(NH)2SO4沉降法得到B2菌株体内的胞内酶,以叔丁醇为溶剂,催化棉籽油与甲醇反应,经过薄层层析和高效液相检测产物为生物柴油。

基于核糖体基因序列快速鉴定产脂肪酶微生物

徐莉;杨江科;刘云;闫云君;

2009, 0(08): 144-150.

摘要 ( 96 )

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利用含罗丹明B的橄榄油检测平板从中国各省市油污土壤中分离、筛选产脂肪酶微生物菌株,扩增细菌的核糖体基因16S rDNA序列和真菌的ITS2序列,分析核糖体基因簇DNA,并结合形态学特征从而对产脂肪酶菌株进行分子生物学鉴定。核糖体基因16S rDNA序列分析及系统发育分析表明,分离得到的产脂肪酶细菌分别属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes)、洋葱伯克霍尔德氏(Burkholderia cepacia)、琼氏不动杆菌(Acinetobater jurii)、嗜麦芽窄食单孢菌(Stenotrophomonas maltophilia)和荧光假单胞菌(Pseudomonas sp.);真菌核糖体基因转录间隔区(ITS2)序列及同源性分析表明产脂肪酶真菌分别属于黑曲酶(Aspergillus niger)、白地酶(Galactomyces geotrichum)、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)、丝孢酵母(Trichosporon guehoae)和假丝酵母(Candida sp.)。研究结果表明,核糖体基因簇的DNA分析技术为从自然界分离、鉴定产脂肪酶菌种提供了一种快速有效的手段,为产脂肪酶微生物资源开发利用奠定了技术基础。

一种简单有效且适于土壤微生物多样性分析的DNA提取方法

张海燕;王彩虹;龚明福;张利莉;

2009, 0(08): 151-155.

摘要 ( 116 )

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参照Zhou[11]的方法进行了改进,获得了一种简单、有效的DNA提取方法。此方法操作简单、从大量样品改为小量样品的提取,利用高浓度的PEG沉淀,不作回收纯化,所提DNA片段较大,在23kb以上,每克土的DNA提取量从3.74～15.28μg,OD260/OD230比值在0.89～1.21范围内,用真菌和细菌核糖体特异性引物进行PCR扩增,均获得较好的结果,DGGE图谱显示丰富性较高,可用于细菌多样性和真菌多样性的分析。此方法能够从4种不同性质土壤中提取出DNA,但提取盐渍土壤和碱性土壤的效果更好一些,为土壤微生物群落结构的多样性分析奠定良好的基础。

白腐真菌SYBC-L2漆酶的分离纯化及其在毛纺染料脱色中的应用

王志新;施晓燕;蔡宇杰;廖祥儒;

2009, 0(08): 156-161.

摘要 ( 83 )

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经过硫酸铵分级盐析、DEAE-cellulose离子交换层析、SephacrylTMS-200柱层析,从白腐菌株Phellinus sp.SYBC-L2所产的漆酶中纯化得到电泳纯漆酶Lac3,其纯化倍数为28.27,回收率为14.76%。Lac3为一种糖蛋白,糖含量29.66%,SDS-PAGE表观分子量约为64.3kD;其催化氧化DMP(2,6-Dimethoxyphenol)的表观Km值和Vmax分别为1.01mmol/L和186.2U/mg蛋白。Lac3的最适温度为60℃,最适pH为3.5;在30℃～50℃和pH4.5～9.0范围内稳定。Cu2+、SO42-、CO32-对Lac3具有一定促进作用,而Fe3+、Fe2+、NO3-则具有抑制作用。色素的最佳脱色条件为(Lac3终浓度为2U/ml):媒介元PV在温度50℃、pH值3.0的条件下反应2h,脱色率可达95.10%;弱酸蓝在温度40℃、pH值4.0的条件下作用3h,脱色率为75.09%。

蛋白激发子PeaT1的高密度发酵及生理功能检测

刘权;李广悦;曾洪梅;杨秀芬;邱德文;

2009, 0(08): 162-165.

摘要 ( 63 )

PDF (429KB) ( 331 )

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PeaT1是从极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)中提取出的一种植物蛋白激发子,具有促进植物生长,增强作物抗逆性的功能。由于该蛋白具有无残留、无毒副作用的优点,因此具有发展为生物农药的应用前景。在100L发酵罐中利用分批补料技术对PeaT1工程菌进行高密度发酵,通过AKTA蛋白纯化仪对发酵产物进行了亲和纯化,并检测了纯化所得蛋白对水稻在15℃低温下生长的影响。发酵最终菌体密度达80g/L,每升菌液纯化得到蛋白90mg,纯化所得蛋白能够促进水稻低温下的生长,具有激发子活性。

盐析法提取烟粉虱基因组DNA

滕希;武强;万方浩;

2009, 0(08): 166-168.

摘要 ( 108 )

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所提供的提取烟粉虱基因组DNA的新方法-盐析法,同氯仿-异戊醇抽提法相比,无需利用研磨棒,提取基因组DNA所用时间更短并且有效地避免了氯仿-异戊醇对实验人员的身体伤害。经检测,利用盐析法可以有效的提取B型烟粉虱的卵、伪蛹和成虫、Q型、ZHJ-1型与ZHJ-2型烟粉虱成虫的基因组DNA,并且适用于RAPD、COI、SSR分子标记的PCR扩增。

基于COI序列快速鉴定花蓟马的DNA条形码芯片初探

冯毅;王莉;白云峰;王洁;冯纪年;

2009, 0(08): 169-173.

摘要 ( 95 )

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利用DNA条形码信息研制DNA芯片,建立快速高效的花蓟马鉴定方法。以3种花蓟马属,共9个样本的COI基因片段序列为研究材料,应用软件Primer Premier5搜索出9个样本的12种motif基因序列,应用这12种motif序列制作虚拟DNA条形码芯片。虚拟电子杂交20个样本的COI基因片段序列。结果显示,设计的虚拟DNA芯片能够鉴定本研究中的3种花蓟马,利用DNACOI基因片段,设计DNA芯片在理论上可行。

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