目的 通过研究辅助成分-蛋白酶(helper component-proteinase, HC-Pro)中第364位保守的赖氨酸(lysine, K364)突变对小西葫芦黄花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus, ZYMV)致病力的影响,构建ZYMV弱毒突变体,并评估其遗传稳定性和交叉保护防治效果,为利用弱毒株开发针对ZYMV的绿色防治策略提供理论依据。 方法 利用定点突变的方法,将HC-Pro中K364位点替换为天冬氨酸(aspartic acid, D),研究K364D突变对ZYMV致病力和HC-Pro RNA沉默抑制活性的影响,构建弱毒突变体ZYMV-HC-ProK364D。通过继代接种实验,测试弱毒突变体ZYMV-HC-ProK364D的遗传稳定性;通过交叉保护实验,评估弱毒突变体ZYMV-HC-ProK364D的交叉保护防治作用。 结果 HC-Pro中K364D突变影响了ZYMV致病力,减轻了病毒在甜瓜(Cucumis melo)植株上引起的典型黄化症状,显著降低了病毒积累水平,同时,该突变削弱了ZYMV HC-Pro的RNA沉默抑制活性。ZYMV-HC-ProK364D-GFP突变体在甜瓜植株中连续3次继代接种后未发生回复突变,保持遗传稳定性。在交叉保护实验中,ZYMV-HC-ProK364D突变体在保护间隔期11 d时,可诱导甜瓜植株产生对野生型ZYMV的显著抗性。 结论 HC-Pro中保守的K364残基是影响ZYMV致病力和HC-Pro RNA沉默抑制活性的关键位点,ZYMV-HC-ProK364D突变体在甜瓜中具有良好的交叉保护作用,可作为弱毒疫苗防治甜瓜ZYMV侵染。