猪γ干扰素在家蚕中的表达和抗病毒活性检测

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.01.024

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (1): 144-148.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.01.024

猪γ干扰素在家蚕中的表达和抗病毒活性检测

刘兴健¹, 李皓洋¹, 胡小元¹, 张志芳¹, 易咏竹², 李轶女¹

1.中国农业科学院生物技术研究所, 北京 100081;
2.中国农业科学院蚕业研究所, 镇江 212018

收稿日期:2015-05-27 出版日期:2016-01-09 发布日期:2016-01-22
作者简介:刘兴健, 男, 博士研究生, 研究方向：病毒分子生物学;E-mail：liuxingjian87@gmail.com
基金资助:
国家高技术研究发展计划“863”(2011AA100603), 国家重点基础研究发展计划(2012CB114600)

Expression and Antiviral Activity Detection of Porcine Interferon -gamma in Silkworm

LIU Xing-jian¹, LI Hao-yang¹, HU Xiao-yuan¹, ZHANG Zhi-fang¹, YI Yong-zhu², LI Yi-nv¹

1. Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural, Beijing 100081;
2. Sericultural Research Institute, Chinese Academy of Agricultural, Zhenjiang 212018

Received:2015-05-27 Published:2016-01-09 Online:2016-01-22

摘要/Abstract

摘要： 干扰素在畜牧养殖业中可以用于病毒性传染病的治疗和疫苗免疫效力的提高, 用杆状病毒表达系统在家蚕中表达了猪γ干扰素。根据已发表的序列对猪γ干扰素基因的密码子进行优化并合成, 将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393上, 与BmBacmid病毒基因组DNA共转染BmN细胞系, 获得重组病毒, 猪γ干扰素基因位于重组BmNPV病毒的多角体基因启动子下游。用该重组病毒感染家蚕获得含有猪γ干扰素的表达产物。Western blotting检测到表达产物中的猪γ干扰素, 用微量细胞病变法利用干扰素抑制VSV-GFP感染VERO细胞的方法来测定干扰素活性, 结果显示干扰素效价可以达到6×10⁵ IU/mL以上。在家蚕幼虫体内成功表达并获得了有活性的猪γ干扰素。

关键词: 猪γ干扰素, 家蚕, 杆状病毒表达系统, 抗病毒活性

Abstract: Interferon is used for threating viral infectious diseases and enhancing vaccine efficacy in stockbreeding. In this study, recombinant porcine interferon-gamma(PoIFNγ)was expressed in silkworm by using Baculovirus expression vector system. Based on the published sequences, the gene of PoIFNγ was artificially synthesized after codon optimization. The optimized gene was firstly cloned into pVL1393 transfer vector of Baculovirus, with virus BmBacmid DNA which was co-transfected into BmN cell line, and recombinant BmNPV was obtained. The PoIFNγ gene was in the downstream of polyhedrosis gene promoter in BmNPV. The silkworm larva infected with recombinant BmNPV gained the expression of PoIFNγ that was detected by Western blotting. The activity of interferon was measured by using micro-cytopathic method that uses interferon to inhibit the VSV-GFP infecting VERO cells. The results showed that the titer of interferon was over 6×10⁵ IU/mL. The activated PoIFNγ was successfully expressed in silkworm larvae.

Key words: porcine interferon-gamma, silkworm, Baculovirus expression system, antiviral activity

刘兴健, 李皓洋, 胡小元, 张志芳, 易咏竹, 李轶女. 猪γ干扰素在家蚕中的表达和抗病毒活性检测[J]. 生物技术通报, 2016, 32(1): 144-148.

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猪γ干扰素在家蚕中的表达和抗病毒活性检测

Expression and Antiviral Activity Detection of Porcine Interferon -gamma in Silkworm

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