聚乙二醇沉淀联用双水相萃取法纯化蛋清溶菌酶的研究

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.05.013

生物技术通报 ›› 2017, Vol. 33 ›› Issue (5): 89-93.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017.05.013

聚乙二醇沉淀联用双水相萃取法纯化蛋清溶菌酶的研究

闻崇炜,赵烨清,石莉,欧阳臻

江苏大学药学院,镇江 212013

收稿日期:2016-12-19 出版日期:2017-05-25 发布日期:2017-05-19
作者简介:闻崇炜,男,博士,副教授,研究方向：生物活性蛋白质分离及功能;E-mail：wenchw@ujs.edu.cn
基金资助:
国家自然科学基金项目（81573529）,江苏大学高级人才启动基金（1281370001）,江苏省普通高校研究生实践创新计划项目（SJLX15_0512）

Purification of Lysozyme from Egg White by Combination of Polyethylene Glycol Precipitation and Aqueous Two-phase Extraction

WEN Chong-wei ZHAO Ye-qing SHI Li OUYANG Zhen

School of Pharmacy,Jiangsu University,Zhenjiang 212013

Received:2016-12-19 Published:2017-05-25 Online:2017-05-19

摘要/Abstract

摘要： 研究以聚乙二醇（Polyethylene Glycol,PEG）沉淀法联用PEG-硫酸铵双水相萃取体系纯化蛋清溶菌酶的工艺。结果表明,向预处理的鸡蛋清液中加PEG 4000至质量分数为16%时,可选择性沉淀除去蛋清中98.1%的杂蛋白,随后向上清液中加硫酸铵溶液至其质量分数为4.32%,可以构建PEG-硫酸铵双水相体系,分离上相即得高纯度溶菌酶。该法所得产物中96.34%为溶菌酶,其余为PEG 4000,不含有其它杂蛋白,溶菌酶总回收率达70.2%,比活为25 000 U/mg。该法简便易行,易于放大,每毫克精制溶菌酶中仅残留36.6 μg PEG 4000,生物安全性较高。

关键词: 聚乙二醇4000, 沉淀法, 双水相法, 溶菌酶

Abstract: This work aims to establish a new technology of purifying lysozyme from egg white based on the combination of polyethylene glycol（PEG）precipitation and aqueous two-phase extraction. The results showed that 98.1% of non-lysozyme proteins were removed by the precipitation when PEG 4000 was added into pretreated egg white until its mass fraction reached 16%. Then,the supernatant of PEG precipitation was collected and mixed with saturated（NH₄）₂SO₄ solution until the mass fraction of this salt reached 4.32%. Therefore,the aqueous two-phase system of PEG/（NH₄）₂SO₄ was established and most of lysozyme could be transferred into the top phase. It was found that 96.34% of the freeze-dried top phase was lysozyme,and the rest was PEG 4000,no any other proteins existed. The recovery rate and the specific activity of lysozyme were 70.2% and 25 000 U/mg,respectively. In conclusion,this purification technology was simple,accurate,safe and reliable,and could be used for large-scale production of lysozyme.

Key words: polyethylene glycol 4000, precipitation, aqueous two-phase extraction, lysozyme

闻崇炜,赵烨清,石莉,欧阳臻. 聚乙二醇沉淀联用双水相萃取法纯化蛋清溶菌酶的研究[J]. 生物技术通报, 2017, 33(5): 89-93.

WEN Chong-wei ZHAO Ye-qing SHI Li OUYANG Zhen. Purification of Lysozyme from Egg White by Combination of Polyethylene Glycol Precipitation and Aqueous Two-phase Extraction[J]. Biotechnology Bulletin, 2017, 33(5): 89-93.

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聚乙二醇沉淀联用双水相萃取法纯化蛋清溶菌酶的研究

Purification of Lysozyme from Egg White by Combination of Polyethylene Glycol Precipitation and Aqueous Two-phase Extraction

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