美洲大蠊i型溶菌酶的原核表达及多克隆抗体制备

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.01.023

生物技术通报 ›› 2016, Vol. 32 ›› Issue (1): 138-143.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.01.023

美洲大蠊i型溶菌酶的原核表达及多克隆抗体制备

王赟¹, 翟素珍², 张春林², 王吉平²

1. 贵州医科大学生物与工程学院, 贵阳 550004;
2.贵州医科大学基础医学院, 贵阳 550004

收稿日期:2015-05-19 出版日期:2016-01-09 发布日期:2016-01-22
作者简介:王赟, 女, 硕士, 研究方向：医学昆虫分子生物学;E-mail：forever_wangyun@sina.cn
基金资助:
贵州省科技合作计划项目(黔科合LH字［2015］7336号), 贵阳市科技计划项目(筑科合同［20151001］社19号), 贵州省科技基金项目(黔科合LH字［2014］7085号), 贵州省教育厅自然科学研究项目(黔教合KY字［2012］039号)

Prokaryotic Expression of i-type Lysozyme from Periplaneta americana and Preparation of Its Polyclonal Antibodies

WANG Yun¹, ZHAI Su-zhen², ZHANG Chun-lin², WANG Ji-ping²

1. School of Biology and Engineering, Guizhou Medical University, Guiyang 550004;
2. School of Basic Medical Sciences, Guizhou Medical University, Guiyang 550004

Received:2015-05-19 Published:2016-01-09 Online:2016-01-22

摘要/Abstract

摘要： 旨在获得美洲大蠊i型溶菌酶PaI的原核表达蛋白, 并制备鼠抗PaI多克隆抗体。PCR扩增PaI成熟肽编码序列, 构建原核表达载体pET28a-PaI, 诱导表达、纯化PaI-His融合蛋白, 免疫Balb/c小鼠, 间接ELISA法检测抗血清效价, Western blotting检测多克隆抗体的特异性。结果显示, PaI成熟肽部分的编码序列长414 bp, 由137个氨基酸组成。构建的原核表达载体pET28a-PaI在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功表达, SDS-PAGE检测显示纯化的PaI-His融合蛋白的大小约为18 kD, 间接ELISA和Western blotting分析表明免疫小鼠产生的抗血清具有较高的效价和较强的特异性。美洲大蠊溶菌酶PaI成功实现原核表达, 并获得了高效价特异性多克隆抗体。

关键词: 美洲大蠊, 溶菌酶, 原核表达, 多克隆抗体

Abstract: The objective of this work is to express i-type lysozyme(PaI)from Periplaneta americana in Escherichia coli and prepare its polyclonal antibodies of anti-PaI in mice. The coding gene of mature peptide region was amplified by PCR and prokaryotic expression vector pET28a-PaI was constructed. PaI-His fusion protein was expressed with IPTG induction and purified by Ni-NTA affinity chromatography. Then, Balb/c mice were immunized with the purified recombinant protein, and the titers of antiserum and the specificity of polyclonal antibodies were detected by indirect ELISA and Western blotting respectively. Results were as below. The length of nucleotide sequence encoding the mature peptide was 414 bp that encoded a putative protein with 137 amino acids. The constructed prokaryotic expression vector pET28a-PaI was successfully expressed in Escherichia coli. SDS-PAGE detection indicated that the PaI-His fusion protein was about 18 kD. Indirect ELISA and Western blotting analysis showed that the antiserum from immunized mice had high titer and specificity. In conclusion, the prokaryotic expression of PaI protein was successfully realized, and the anti-PaI polyclonal antibody with high efficiency and specificity were prepared, which laid the foundation for the further researches on the biological function of PaI protein.

Key words: Periplaneta americana, lysozyme, prokaryotic expression, polyclonal antibody

王赟, 翟素珍, 张春林, 王吉平. 美洲大蠊i型溶菌酶的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 生物技术通报, 2016, 32(1): 138-143.

WANG Yun, ZHAI Su-zhen, ZHANG Chun-lin, WANG Ji-ping. Prokaryotic Expression of i-type Lysozyme from Periplaneta americana and Preparation of Its Polyclonal Antibodies[J]. Biotechnology Bulletin, 2016, 32(1): 138-143.

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美洲大蠊i型溶菌酶的原核表达及多克隆抗体制备

Prokaryotic Expression of i-type Lysozyme from Periplaneta americana and Preparation of Its Polyclonal Antibodies

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