家蝇抗真菌肽-溶菌酶基因的克隆、表达及序列分析

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.031

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (5): 200-205.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.031

家蝇抗真菌肽-溶菌酶基因的克隆、表达及序列分析

彭传林^1，2, 魏川川¹, 吴建伟¹, 王宇^1，3, 修江帆¹, 尚小丽¹, 赵学军¹

（1.贵阳医学院寄生虫学教研室，贵阳 550004；2.皖北煤电集团总医院，宿州 234000；3.贵州省疾病预防控制中心，贵阳 550004）

收稿日期:2014-09-01 出版日期:2015-05-18 发布日期:2015-05-18
作者简介:彭传林，男, 硕士研究生，主治医师，研究方向：分子生物学；E-mail：2463749164@qq.com
基金资助:
国家科技支撑计划（2011BAC06B12），国家自然科学基金项目（81360254），贵州省科学技术基金项目（黔科合J字［2012] 2038号）

Cloning，Expression and Sequence Analysis of Musca domestica Antifungal Peptide-1 and Musca domestica Lysozyme

Peng Chuanlin ^1，2, Wei Chuanchuan¹, Wu Jianwei¹, Wang Yu^1，3, Xiu Jiangfan¹, Shang Xiaoli¹, Zhao Xuejun¹

（1. Department of Parasitology，Guiyang Medical College，Guiyang 550004；2. General Surgery of Wanbei Coal-electricity Group General Hospital，Suzhou 234000；3. Guizhou Center for Disease Control and Prevention，Guiyang 550004）

Received:2014-09-01 Published:2015-05-18 Online:2015-05-18

摘要/Abstract

摘要： 旨在对家蝇抗真菌肽MAF-1-溶菌酶（LZM）基因进行生物信息学分析，并进行融合基因MAF-1-LMZ的克隆和表达分析。从GenBank获得家蝇抗真菌肽MAF-1和溶菌酶LZM的编码序列，分析和预测这两种蛋白质的结构和功能。PCR扩增融合蛋白质抗真菌肽-溶菌酶的基因 MAF-1-LMZ，将其克隆到原核表达载体pET-28a中，重组质粒pET-28a-MAF-1-LMZ在大肠杆菌OrigmiB/DE3中经用IPTG诱导表达，表达产物MAF-1-LMZ通过SDS-PAGE电泳进行鉴定，采用小试管法倍比稀释法进行活性验证。结果显示，融合蛋白质MAF-1-LMZ序列的ORF为969 bp，编码322个氨基酸残基，理论分子量为35 468.6 Da，等电点为8.31，在大肠杆菌OrigmiB/DE3中得到成功表达。其纯化后的目的蛋白具有抗真菌活性。

关键词: 家蝇, 抗真菌肽-溶菌酶, 重组表达, 序列分析

Abstract: The aim of this study is to have bioinformatics analysis of Musca domesitca antifungal peptide-1（MAF-1）and lysozymeb（LMZ）, also clone fused MAF-1-LMZ gene and have expression analysis of it. The encoding sequences of MAF-1 and LMZ were fetched from GenBank, and the structures and functions of 2 proteins were analyzed and predicted. The gene MAF-1-LMZ was amplified by polymerase chain reaction（PCR）, then was ligated into pET 28a and transformed into E. coli Origmi（DE3）competent cell, and induced with IPTG. The fusion protein MAF-1-LMZ in the expression vector was analyzed by SDS-PAGE. The activity of the protein was validated by methods of small test tube and doubling dilution. The open reading frame of the MAF-1-LMZ was 969 bp, encoding a putative protein consisting of 322 amino acids with a predicted molecular weight of 35 468.6 Da and pI of 8.31, indicating the gene expressed in E. coli Origmi（DE3）successfully. The purified target protein had the antifungal activity.

Key words: Musca domestica, antifungal peptide-1 with Lysozyme, recombinant expression, sequence analysis

引用本文

彭传林, 魏川川, 吴建伟, 王宇, 修江帆, 尚小丽, 赵学军. 家蝇抗真菌肽-溶菌酶基因的克隆、表达及序列分析[J]. 生物技术通报, 2015, 31(5): 200-205.

Peng Chuanlin , Wei Chuanchuan, Wu Jianwei, Wang Yu, Xiu Jiangfan, Shang Xiaoli, Zhao Xuejun. Cloning，Expression and Sequence Analysis of Musca domestica Antifungal Peptide-1 and Musca domestica Lysozyme[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(5): 200-205.

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