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利用PCR对PVX外壳蛋白基因进行同义密码子修饰

冯德江;徐军望;路子显;陈蕾;徐鸿林;李旭刚;朱祯   

  1. 中国科学院遗传与发育生物学研究所,中国科学院遗传与发育生物学研究所,中国科学院遗传与发育生物学研究所,中国科学院遗传与发育生物学研究所,中国科学院遗传与发育生物学研究所,中国科学院遗传与发育生物学研究所,中国科学院遗传与发育生物学研究所 北京100101
  • 出版日期:2003-08-26 发布日期:2003-08-26
  • 基金资助:
    国家重点基础研究发展计划 973 (批准号 :G2 0 0 0 0 162 0 5 );; 国家自然科学基金重点资助项目 (批准号 :3 99890 0 1)

  • Published:2003-08-26 Online:2003-08-26

摘要: 利用聚合酶链式反应 (PolymeraseChainReaction ,PCR)与限制性内切酶相结合的方法 ,设计 4条含有限制性酶切位点和相应突变的引物。以马铃薯X病毒 (PotatoVirusX ,PVX)外壳蛋白cp基因为模板 ,扩增出相应的片段 ,相应酶切后通过三片段连接构建到克隆载体pBlueKS(+/ - )上。随机挑选重组子测序表明 ,利用三片段拼接成功地在PVX外壳蛋白基因的不同部位产生了突变。实验结果说明利用三片段接可以大大提高筛选得到突变子的效率 ,从而节省人力、物力和时间。

关键词: 聚合酶链式反应, 限制性内切酶, 克隆载体, 连接