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原核生物核糖核酸酶HII基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

席慧;刘凤华;周霞;徐燕;李永海;高音   

  1. 首都师范大学生物系,首都师范大学生物系,首都师范大学生物系,首都师范大学生物系,首都师范大学生物系,首都师范大学生物系 北京100037
  • 出版日期:2004-06-26 发布日期:2004-06-26

  • Published:2004-06-26 Online:2004-06-26

摘要: 核糖核酸酶HII (RNaseHII)能有效降解RNA和DNA杂交链中的RNA链。为进一步研究其功能 ,利用大肠杆菌XL1blue为模板 ,相应的寡聚脱氧核苷酸为引物 ,PCR扩增大肠杆菌RNaseHII(rnh 2 )基因 ,并将目的基因连接到克隆载体 pUC18上 ,经测序确认无误 ,分别亚克隆到能够进行IPTG诱导的表达载体pTrcHisC和进行温度诱导的表达载体pBV2 2 0上。重组质粒转化到大肠杆菌DH5α细胞中获得高效表达。在载体pTrcHisC和 pBV2 2 0中目的蛋白RNaseHII的表达量均超过菌体总蛋白的 2 0 % ,且表达产物以稳定的包涵体形式存在。此项工作为以后目的蛋白的纯化提供了有利条件 ,并为研究其结构和功能奠定了基础。

关键词: 核糖核酸酶H, 核糖核酸酶HII, 诱导表达, 包涵体