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RNA干扰技术抑制内源性绿色荧光蛋白的表达

陈维贤;黄爱龙;闫歌;唐霓;张娟;陈娟;   

  1. 重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病重点实验室,重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病重点实验室,重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病重点实验室,重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病重点实验室,重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病重点实验室,重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病重点实验室 重庆400016,重庆400016,重庆400016,重庆400016,重庆400016,重庆400016
  • 出版日期:2005-12-26 发布日期:2005-12-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(30400374)

  • Published:2005-12-26 Online:2005-12-26

摘要: 目的建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的细胞株;构建短发夹RNA(shRNA)表达质粒并观察其对内源性GFP的抑制作用。方法转染pEGFP-N1至HepG2细胞,利用G418筛选获得稳定表达GFP的细胞株(HepG2.GFP);设计合成针对GFP基因的siRNA对应的DNA片段,插入转录载体pTZU6+1,构建shRNA表达载体pSHGFP,转染HepG2.GFP,荧光显微镜观察细胞荧光强度,以western blot检测GFP蛋白水平,以RT-PCR检测mRNA水平。结果利用PCR方法从HepG2.GFP细胞基因组DNA中检测到GFP基因;pSHGFP能够显着抑制该细胞中GFP的表达。结论GFP基因成功整合至HepG2细胞基因组中,pSHGFP能够显着抑制内源性GFP的表达,该系统能够用于RNA干扰机制等研究中。

关键词: RNA干扰, 绿色荧光蛋白, 短发夹状RNA