]*>","")" /> 一种新的克隆基因方法——重组工程应用研究初报

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一种新的克隆基因方法——重组工程应用研究初报

邹少兰;洪解放;刘成;张敏华;   

  1. 天津大学石化中心,天津大学石化中心,天津大学石化中心,天津大学石化中心 天津300072,天津300072,天津300072,天津300072
  • 出版日期:2007-04-26 发布日期:2007-04-26

  • Published:2007-04-26 Online:2007-04-26

摘要: 重组工程(recombineering)是近几年来兴起的一种基于体内同源重组的、新型的遗传工程技术。作为重组工程应用方式之一的空隙修复(gap-repair),是一种捕捉和克隆目的DNA的方法,具有操作简单、步骤少,没有突变、保真度高,不受酶切位点限制等等优点。以pACYC184为模板,PCR扩增含p15A复制子、氯霉素抗性基因和对S.cerevisiaeALD4基因同源臂的线性片段,与酵母染色体DNA共同电击转化诱导型表达了λ噬菌体重组酶活性的大肠杆菌BW25113(pKD46)感受态细胞,通过空隙修复方式,成功地从酵母染色体DNA直接捕捉到大小为1 016bp的ALD4基因部分区段,得到3188bp的重组质粒pACYC184-ALD4。为进一步掌握和充分利用该技术直接捕捉更大片段基因打下了基础。

关键词: 重组工程, 空隙修复, 捕捉, DNA