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种子特异性表达噬夏孢欧文氏菌crtB基因的植物表达载体构建

刘慧娟;郎君;冯志国;何光源;   

  1. 华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理教育部重点实验室;
  • 出版日期:2009-01-26 发布日期:2009-01-26
  • 基金资助:
    国家973计划项目(2002CB111300)

  • Published:2009-01-26 Online:2009-01-26

摘要: 利用PCR技术扩增出tp和crtB基因,胶回收后分别连接到pMD18-T载体测序。tp和crtB基因经酶切回收后通过pBlue-scriptKS质粒连在一起构建成pSK-tp-crtB,通过BamHⅠ和SacⅠ酶切,从pSK-tp-crtB载体上切下目的基因片段tp-crtB,替换pBI121-napA载体中的GFP基因,构建了tp-crtB基因在植物种子中特异性表达的载体pBI121-tp-crtB。转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α。测序鉴定后将阳性质粒转化农杆菌感受态细胞EHA105,经菌液和质粒PCR分析,获得了真核表达载体pBI121-tp-crtB,为crtB基因功能的进一步研究奠定基础。

关键词: crtB基因, 根癌农杆菌, 遗传转化, 植物表达载体