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弓形虫表面抗原SAG1截短型片段在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

安立刚;蒋蔚;王权;陈永军;龚国华;周锦萍;邢小勇;孙泉云;丁铲;   

  1. 中国农业科学院上海兽医研究所农业部寄生虫学重点开放实验室;上海市动物疫病防控中心;
  • 出版日期:2009-10-26 发布日期:2009-10-26
  • 基金资助:
    公益性行业(农业)科研专项经费项目(200803017);; 上海市科技兴农重点攻关项目[沪农科攻字(2006)第5-4号]

  • Published:2009-10-26 Online:2009-10-26

摘要: 在大肠杆菌中高效表达及纯化获得可溶性、有反应活性的弓形虫表面抗原SAG1截短型片段(tSAG1),为研制新型的弓形虫病检测试剂奠定基础。构建重组质粒pET-32a-tSAG1并将其转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达菌株,在异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导下表达蛋白。SDS-PAGE分析表达产物的表达形式,通过降低培养温度、降低摇床转数和升高LB液体培养基pH,诱导目的蛋白在上清中表达,利用His.Bind Kit试剂盒对目的蛋白进行纯化,Western blot和ELISA检测纯化蛋白的反应原性。在IPTG为1mmol/L、温度37℃条件下,tSAG1以融合蛋白(His-tSAG1)的形式在大肠埃希菌中高效表达,表达产物以包涵体形式存在。在22℃和LB培养基pH为7.7条件下,融合蛋白主要在上清中表达。Western blot和ELISA分析纯化蛋白能被弓形虫的阳性血清所识别。tSAG1在大肠埃希菌中得到了可溶性蛋白表达,经纯化后能被弓形虫的阳性血清所识别,可用于制备检测弓形虫病的诊断试剂。

关键词: 弓形虫, tSAG1, 蛋白表达, 蛋白纯化, 免疫印迹, ELISA