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应用竞争PCR方法检测亚硝化细菌的研究

张艳;李秋芬;王晓熙;   

  1. 中国水产科学研究院黄海水产研究所;中国海洋大学生命科学与技术学院;
  • 出版日期:2009-06-26 发布日期:2009-06-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(30200209);; 农业部海洋生物资源可持续利用重点开放实验室院士基金特别资助项目

  • Published:2009-06-26 Online:2009-06-26

摘要: 选用竞争PCR技术建立了亚硝化细菌的快速定量检测方法。实验以实验室分离、鉴定的一株亚硝化细菌提取的DNA为模板,设计特异性引物,制备特异性内标模板,进行竞争PCR实验;同时采用传统的平板计数法和吖啶橙荧光显微镜计数法两种方法进行细菌计数,与竞争PCR结果比较分析,建立了样品细菌数量与内标模板量的线性方程,并将其应用于海水养殖环境中亚硝化细菌的检测中。该方法具有简化检测过程、缩短细菌检测时间、无须昂贵仪器设备等优点,并克服有些环境微生物难以培养的困难,为将来有益菌在应用中实际存活和繁殖情况的监测提供了有力的技术支撑。

关键词: 竞争PCR, 亚硝化细菌, 定量检测, 内标模板