光裸星虫ISSR-PCR反应体系的单因素优化试验

光裸星虫ISSR-PCR反应体系的单因素优化试验

彭银辉;宋忠魁;蔡小辉;杨家林;刘丽梅;

广西海洋研究所广西海洋生物技术重点实验室;

出版日期:2011-01-26 发布日期:2011-01-26
基金资助:
广西海洋生物技术重点实验室主任基金课题(GKLMBT-D0801)

Published:2011-01-26 Online:2011-01-26

摘要/Abstract

摘要： 以光裸星虫为试验材料,通过单因素方法对影响其ISSR-PCR扩增效果的因子(模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶、甲酰胺和二甲基亚砜)浓度进行研究。确立适合光裸星虫ISSR-PCR的反应体系:25μL体积含1×PCR buff-er、模板DNA用量为10-50 ng、TaqDNA聚合酶为0.75-1.75 U、Mg2+浓度为1.5-2.5 mmol/L、dNTP浓度为0.20 mmol/L,引物浓度为0.8-1.2μmol/L,甲酰胺和二甲基亚砜的添加并不能优化光裸星虫ISSR-PCR反应结果。利用所建立的体系对广西北海群体的20个光裸星虫个体基因组DNA进行ISSR-PCR扫描,结果表明,优化后的体系均能扩增出清晰、多态性高的条带。

关键词: 光裸星虫, ISSR, 优化, 单因素

彭银辉;宋忠魁;蔡小辉;杨家林;刘丽梅;. 光裸星虫ISSR-PCR反应体系的单因素优化试验[J]. .

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