]*>","")" /> 黑暗链霉菌DNA同源重组系统的构建

• 论文 • 上一篇    下一篇

黑暗链霉菌DNA同源重组系统的构建

朱碧银;洪文荣;严绍德;朱宝泉;林玉双;封成军;   

  1. 福州大学生物科学与工程学院;上海医药工业研究院;常州方圆制药有限公司;
  • 出版日期:2011-04-26 发布日期:2011-04-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(31070093/30801449);;福建省教育厅科研项目(2007F5070);; 国家综合性新药研究开发技术大平台项目(2009ZX09301-007)

  • Published:2011-04-26 Online:2011-04-26

摘要: 以黑暗链霉菌Tt-49基因组为模板,利用PCR方法,扩增安普霉素生物合成关键基因aprF-G的上、下游序列,作为同源交换臂,并将红霉素抗性基因筛选标记及其启动子插入两交换臂之间,以温敏型质粒pKC1139为基础,构建用于阻断黑暗链霉菌Tt-49安普霉素生物合成的重组质粒pFD8。该质粒通过E.coli ET12567/pUZ8002去甲基化修饰后,经接合转移进入黑暗链霉菌Tt-49,利用红霉素抗性筛选得到3株阳性转化子,分别命名为Tt-49 AG1、Tt-49 AG2和Tt-49 AG3。通过PCR鉴定,证明pFD8已插入黑暗链霉菌Tt-49基因组的目标位点。以亲株作对照,对3株工程菌进行红霉素抗性能力考察,发现3株工程菌的抗红霉素能力均高达1 000μg/mL以上。

关键词: 黑暗链霉菌, 抗生素基因组学, 同源重组, 安普霉素