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人Notch受体胞内区基因N2ICD和N3ICD克隆及真核表达体系的构建

孙芳;李玉霞;毛艳;凌焱;张小男;李伟东;刘刚;梁龙;陈珊;陈惠鹏;   

  1. 军事医学科学院生物工程研究所;东北师范大学;安徽中医学院;
  • 出版日期:2012-07-26 发布日期:2012-07-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(81000763)

  • Published:2012-07-26 Online:2012-07-26

摘要: Notch信号通路与多种肿瘤的发生发展密切相关。对该通路中各受体功能的深入研究能够为揭示其致癌作用奠定基础。本研究采用RT-PCR的方法从人宫颈癌细胞系HeLa细胞的cDNA中克隆人Notch2和Notch3受体胞内区基因(N2ICD和N3ICD基因),并构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体N2ICD/pEGFP和N3ICD/pEGFP,将序列正确的重组质粒转染HeLa细胞,显微镜下可见明显的绿色荧光,并定位在细胞核内。Western blotting检测目的蛋白成功融合表达,并能够提高其下游靶基因Hes1的转录活性。

关键词: Notch信号通路, N2ICD/pEGFP, N3ICD/pEGFP, 真核表达