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环介导间接PCR检测方法的建立

王永芬;郑鸣;边传周;   

  1. 郑州牧业工程高等专科学校;
  • 出版日期:2012-08-26 发布日期:2012-08-26
  • 基金资助:
    河南省重点科技攻关项目(092102110073)

  • Published:2012-08-26 Online:2012-08-26

摘要: 建立环介导间接PCR检测体系,为分子诊断提供一种新的检测工具。以质粒pUC18的核苷酸序列为模板,设计两条特异性探针,采用常规PCR技术将特异性探针标记于大豆Lectin基因的左右两端充当报告基因,此标记的报告基因与待检的pUC18质粒经杂交和缺口补平后形成一环状DNA分子,然后采用反向PCR技术扩增报告基因,建立针对pUC18质粒的环介导间接PCR检测方法。结果表明,该检测方法的检测底限为0.32 pg/μL,与常规PCR相当,并且与其他质粒和动物DNA检测无交叉反应,是一种简单、快速、灵敏、特异的PCR检测方法。

关键词: 探针, 报告基因, 环介导间接PCR, 建立, 分子诊断