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鹅副黏病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及应用

鲜思美;韦洪才;尹强军;孔维祥;苏刚;   

  1. 贵州大学动物科学学院;贵州省动物疫病研究所;
  • 出版日期:2012-11-26 发布日期:2012-11-26
  • 基金资助:
    贵州大学大学生创新性实验计划项目[贵大创字(2011)077号]

  • Published:2012-11-26 Online:2012-11-26

摘要: 参照GenBank中登录的鹅副黏病毒(gallinacean paramyxovirus,GPMV)序列(AY325797),针对GPMV的F基因保守区域设计了4条引物,通过优化反应条件,建立了检测GPMV的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),并进行了特异性试验、敏感性试验及临床样本检测。结果显示,建立的RT-LAMP方法对GPMV阳性样品扩增产物的电泳呈特征性梯状条带,而鸭瘟病毒(DPV)、鹅细小病毒(GPV)、番鸭细小病毒(MDPV)、鸭肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)、鸭源沙门氏菌(Salmonella anatamu)、鸡马立克病毒(MDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的扩增产物电泳后均无扩增条带。建立的RT-LAMP方法对GPMV的最低检出量为9.5 fg的cDNA模板,敏感性比常规RT-PCR方法高1 000倍。表明建立的RT-LAMP方法特异性强、敏感性高。对6份临床样本的检出率为100%(6/6),与常规RT-PCR的符合率为100%。

关键词: 鹅副黏病毒, 逆转录环介导等温扩增技术, 检测