T7噬菌体表达载体的组氨酸改造及应用

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (7): 179-183.

T7噬菌体表达载体的组氨酸改造及应用

樊江平¹ 钟理^1，2 董晓民¹ 张旭胐¹ 王志强³

（1.河北大学生命科学学院，保定 071002；2. 健康科学西部大学，波莫纳 91766；3.中国21世纪议程管理中心，北京 100038）

收稿日期:2013-03-03 修回日期:2013-07-19 出版日期:2013-07-19 发布日期:2013-09-02
作者简介:樊江平，女，硕士研究生，研究方向：癌症早期诊断蛋白芯片；E-mail：maze915@yahoo.com.cn
基金资助:
国家自然科学基金资助项目（81071795，81272444）

Constrution and Application of T7 Phage Vector with a Histidine Tag

Fan Jiangping¹ Zhong Li^1，2 Dong Xiaomin¹ Zhang Xufei¹ Wang Zhiqiang³

（1. College of Life-Science，Hebei University，Baoding 071002；2 .Western University of Health Sciences，Pomona，California，USA 91766；3. The Administrative Center for China’s Agenda 21，Beijing 100038）

Received:2013-03-03 Revised:2013-07-19 Published:2013-07-19 Online:2013-09-02

摘要/Abstract

摘要： 利用基因重组技术，对已有载体T7 Select10-3b进行改造，得到被组氨酸标签标记（His-Tag）的新型表达载体，并利用该载体构建cDNA文库，为后期开放阅读框的筛选提供更为简便有效的方法。以T7 Select10-3b载体为出发材料，将复性得到组氨酸标签表达序列插入其多克隆位点处。再利用包装蛋白包装重组DNA，得到有侵染活性的重组T7噬菌体。用该载体构建乳腺癌cDNA文库，过镍柱，筛选开放阅读框（open reading frame，ORF），计算ORF重组率。测序结果显示该标签已经成功插入，化学发光免疫检测显示该标签在T7中表达。重组T7噬菌体文库的ORF筛选率由筛选前的5.6%提高到82%。T7噬菌体中插入的His标签对提高cDNA文库中ORF的重组率具有重要意义。

关键词: His标签, T7噬菌体, cDNA文库, ORF

Abstract: A new type of histidine tag expression vector was obtained on the basis of the vector T7 Select10-3b through gene recombination technology. The recombined vector was used to construct cDNA library as an effective method of screening open reading frame（ORF）. A His-Tag was inserted into multiple clone site of vector T7. The sequence of His-Tag was obtained by renaturation. In order to get infectious T7 phage, T7 packaging extracts was utilized to package recombined DNA. CDNA library was constructed using modified vector, and ORF was purified by Ni-nitrilotriacetate affjnity chromatography. DNA sequencing revealed that His-Tag was inserted into the expression vector accurately. Chemiluminescence immunoassay displayed that inserted His-Tag sequence could express accurate protein. Screening rate of ORF rised from 5.6% to 82%. It proved that vector T7 inserted His-Tag had important significance for ORF screening.

Key words: His-Tag, T7 phage, cDNA library, ORF

樊江平,钟理,董晓民,张旭胐,王志强. T7噬菌体表达载体的组氨酸改造及应用[J]. 生物技术通报, 2013, 0(7): 179-183.

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