生物技术通报

邢国芳, 郭平毅

2013, 0(7): 1-6.

摘要 ( 310 )

PDF (1473KB) ( 1677 )

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磷对植物的生长发育起着重要的作用，但土壤有效磷含量不足已成为世界范围内制约作物产量和品质提高的重要因素。植物在遭受低磷胁迫时，体内会形成适应性机制，因此解析调控植物对低磷胁迫适应性的分子机制也成为科学领域的一大热点。从功能基因组的角度，包括磷胁迫诱导的差异基因表达谱、差异基因的功能类别、基因调控网络、非编码RNA以及植物激素参与的植物耐低磷调控机制等方面综述了近年来植物响应低磷胁迫的分子机制。

CHLH的ABA受体之争

任杰,冷平,孙福山,徐秀红

2013, 0(7): 7-11.

摘要 ( 312 )

PDF (2092KB) ( 1430 )

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镁螯合酶H亚基是叶绿素合成关键酶之一，自2006年在拟南芥上证明CHLH为ABA受体以来，有关CHLH与ABA信号传递的关系在大麦、甜樱桃、草莓、桃等方面已有报道，但不同研究结果对CHLH是否为ABA受体仍然存有争议。全面评述CHLH与ABA信号传递的关系研究进展概况，重点介绍CHLH是否为ABA受体以及CHLH对ABA信号感知和向下游转导的研究进展。

黑曲霉葡萄糖氧化酶高产基因工程菌研究进展

刘瑜,李丕武

2013, 0(7): 12-19.

摘要 ( 546 )

PDF (1342KB) ( 2070 )

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葡萄糖氧化酶能够催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸-δ-内酯，具有广泛的应用领域。黑曲霉是传统的产葡萄糖氧化酶工业菌种，经过几十年的工业应用，产酶水平已经达到极限。目前应用于表达葡萄糖氧化酶的表达系统主要有黑曲霉、酿酒酵母和巴斯德毕赤酵母。近些年来蛋白质定向进化手段开始应用于葡萄糖氧化酶的分子改造，有望使黑曲霉葡萄糖氧化酶的工业化产量得到进一步的提高。介绍葡萄糖氧化酶高产基因工程菌研究进展。

青枯菌种内分型研究进展

蔡刘体,汪汉成,刘艳霞,曹毅,袁赛飞,赵准备,石俊雄

2013, 0(7): 20-23.

摘要 ( 320 )

PDF (1193KB) ( 1346 )

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青枯菌是一种土传性的细菌性病原菌，可侵染50多个科的200多种植物，包括马铃薯、烟草和番茄等茄科经济作物，严重危害一些农作物的产量和质量。青枯菌是一个复杂的种，综述青枯菌种内分型的研究进展，包括生理小种（races）、生化型（biovars）、种系型（phylotypes），并对不同的分型进行比较，期望为烟草青枯菌系的构成和遗传多样性分析，以及为研究烟草与青枯菌互作提供其分析信息。

水生生物谷胱甘肽相关酶对持久性有毒物质响应机理的研究

李绍娟,王一枭,赵欢,周一兵

2013, 0(7): 24-28.

摘要 ( 296 )

PDF (1270KB) ( 945 )

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谷胱甘肽酶类作为生物体内重要的Ⅱ相解毒酶类和抗氧化酶类的重要组成部分，在持久性有毒物质的生物代谢中具有重要作用。主要介绍水生生物体内谷胱甘肽硫转移酶和谷胱甘肽过氧化物酶对有机污染物和重金属的解毒效应及其在分子生物学方面的研究成果，并对其在环境监测和污染诊断方面的应用前景以及今后的研究方向进行展望。

虾蟹类卵巢发育调节机制研究进展

王晓伟,张子平,王艺磊,贾锡伟,林鹏

2013, 0(7): 29-35.

摘要 ( 349 )

PDF (1369KB) ( 2552 )

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虾蟹类生殖发育的调控需要神经肽、激素和神经递质等多种调节因子的参与，涉及到生殖细胞周期调控和卵黄发生等多种复杂有序的生物学过程。神经肽的主要来源是甲壳动物X器官-窦腺（X-organ-sinus gland，XO-SG）复合体，脑和胸神经节。由其合成和分泌的CHH家族多肽在调节性腺发育的过程中起着关键作用。综述虾蟹类性腺发育调控的研究进展。

核苷酸结合寡聚化结构域NOD样受体（NLRs）研究进展

李奕平,王潇

2013, 0(7): 36-40.

摘要 ( 447 )

PDF (1243KB) ( 2940 )

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先天免疫系统是防御微生物的第一道防线。最近几年，人们发现一种新的蛋白家族——核苷酸结合寡聚化结构域NOD样受体(NLRs)，可以识别、抵御微生物病原体，在动物和植物体内的先天免疫中起重要作用。NLR蛋白激活后导致NF-κB，MAPK或半胱氨酸天冬氨酸酶的激活，从而介导炎症反应。对NLR家族及与之相关的炎症性疾病进行论述，并对NLR家族在炎症性疾病治疗的应用前景作展望。

表型组学：解析基因型-表型关系的科学

李宏,韦晓兰

2013, 0(7): 41-47.

摘要 ( 534 )

PDF (1546KB) ( 2415 )

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表型组学是近年来发展起来的一门新科学，主要对在不同环境下的基因型全部细胞表型进行系统研究。表型组学在基因型-表型作图、复杂性状疾病的遗传基础研究、作物改良方面都有广泛的应用，同时表型组学研究也面临着巨大挑战。基因组数据的广泛特征直接催生了以基因组序列为研究起点的新科学。就表型组学的学科范畴进行深入浅出的介绍，综述表型组学在基因型-表型作图、复杂性状疾病的遗传基础研究、作物改良方面的应用以及表型组学研究面临的挑战。并就目前生物信息学在表型组学中的应用以及表型组学未来和展望进行讨论。

半持久性病毒的介体传播机制研究进展

田晓,李玲娣,刘金香

2013, 0(7): 48-53.

摘要 ( 339 )

PDF (1182KB) ( 1528 )

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大多数植物病毒依靠昆虫进行传播，半翅目昆虫是最常见的传播介体。昆虫的传毒特性一般分为非持久性、半持久性和持久性传播。介体与其所传播病毒的相互作用机制复杂，主要为外壳机制和辅助机制。目前发现的半持久性病毒主要属于长线形病毒科（Closteroviridae）、花椰菜花叶病毒科（Caulimoviridae）、曲线病毒科（Flexiviridae）和伴生病毒科（Sequiviridae）等。近年来昆虫传毒机制尤其是半持久性病毒的传播机制的研究受到越来越广泛的关注，就该领域的研究进展作一概述。

甜瓜乙烯受体基因Cm-ETR1 cDNA的克隆及表达特性分析

陈宇杰,陈明,乌兰巴特尔,郝金凤,高峰,哈斯阿古拉

2013, 0(7): 54-59.

摘要 ( 212 )

PDF (2115KB) ( 696 )

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乙烯感知和信号转导的初始成分是乙烯受体，为探明甜瓜乙烯受体基因Cm-ETR1在甜瓜果实成熟过程中的作用，以甜瓜品种河套蜜瓜为材料，根据GenBank中登录的甜瓜乙烯受体基因Cm-ETR1的cDNA序列（登录号为AF054806），设计合成特异性引物，采用RT-PCR技术克隆得到Cm-ETR1基因全长 cDNA序列，提交到GenBank中（登录号为EF495185）。序列分析表明，序列长度为2 256 bp，编码区为2 223 bp，编码740个氨基酸，与已报道的cantalupenis甜瓜ETR1基因的cDNA序列完全一致。Cm-ETR1蛋白的系统进化树分析结果表明，该乙烯受体蛋白在各物种间高度保守，与黄瓜乙烯受体蛋白相似性最高，一致性为99%，与龙眼乙烯受体蛋白相似性最低，一致性为86%。定量PCR分析结果显示，随着甜瓜果实内源乙烯合成量和成熟程度的增加，Cm-ETR1基因的表达量同步增加，在果实乙烯跃变期，Cm-ETR1的表达量也达到最高值，内源乙烯合成量与Cm-ETR1基因表达量间呈显著正相关，表明Cm-ETR1基因在甜瓜果实成熟过程中可能具有重要的作用。

栀子ERF基因的克隆及其在果实成熟过程中的表达

高蓝,卢静雯

2013, 0(7): 60-65.

摘要 ( 280 )

PDF (2639KB) ( 889 )

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乙烯反应元件因子（ethylene-responsive element-binding factor，ERF）是一类植物DNA 结合蛋白，是乙烯信号传导过程中的一类转录因子，与植物的生长发育和生理过程有关。从栀子（Gardenia jasminoides Ellis）果实的cDNA文库中筛选获得栀子乙烯反应元件因子GjERF的cDNA。该基因全长962 bp，5'端非翻译区长82 bp，3'端非翻译区长100 bp，预测ORF为780 bp，编码259个氨基酸，分子量为28.6 kD。序列分析表明GjERF含有59个氨基酸构成的AP2/ERF结构域及N端的MC（MCGGAII）模体，它属于ERF家族的第Ⅶ亚类。RT-PCR分析表明GjERF基因在栀子成熟叶片中的表达高于在果实中的表达，并且在果实中的表达与果实的成熟过程无关。

月季查尔酮合成酶基因片段的克隆及其表达分析

张云婷,于定群,程怡,汤浩茹,王清明,张勇

2013, 0(7): 66-70.

摘要 ( 299 )

PDF (1770KB) ( 830 )

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采用改良CTAB法从月季（Rosa hybrida）花瓣中成功提取出总RNA，进行反转录合成cDNA模板。根据GenBank已发表的其他植物CHS基因序列的保守结构域设计简并引物，采用同源克隆法进行克隆，获得RhCHS片段序列，并分析该片段的生物学信息，利用半定量 RT-PCR 对不同花发育时期进行表达分析。序列分析结果表明，克隆到的cDNA片段长度为860 bp，编码287个氨基酸残基，GenBank登录号KC145553。同源序列比对发现，月季RhCHS与其他植物的同源性很高，说明CHS 在进化的过程中具有高度的保守性。表达谱分析表明，CHS在盛花期表达量最高。

转基因水稻检测用阳性质粒分子的构建及应用

李晓飞,谭小力,李俊,武玉花,曹应龙

2013, 0(7): 71-77.

摘要 ( 286 )

PDF (1575KB) ( 1377 )

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通过分析转基因水稻（Oryza sativa）中调控元件和功能基因的种类及应用频率，结合水稻基因工程研究中标记基因的使用情况，确定将 CaMV35S 启动子、NOS 终止子，标记基因 Bar、HPT 和 NPTⅡ基因作为转基因水稻的筛查检测靶标。通过重叠延伸 PCR 技术，将水稻内标基因 SPS、筛选靶标（CaMV35S启动子、NOS终止子、Bar基因、HPT基因和NPTⅡ基因）、事件特异性检测靶标（TT51-1、KF-6和KMD1）聚合克隆到质粒载体上，构建质粒分子pBS Rice。应用结果表明，阳性质粒分子pBS Rice既适用于转基因水稻的筛查检测，也适用于抗虫水稻TT51-1、KF-6和KMD1的事件特异性检测。研究结果为转基因水稻安全监管提供了一种不依赖于转基因水稻原材料供应的阳性对照，其对目前国内外批准的转基因水稻检出率达100%，满足了监管过程中转基因水稻的检测需要。

燕麦嗜酸菌鞭毛素的提纯及其活性检测

伍甜,刘莹,余超,边强,田芳,黄琼,陈华民,何晨阳

2013, 0(7): 78-81.

摘要 ( 232 )

PDF (4353KB) ( 873 )

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为阐明燕麦嗜酸菌（Aaa）鞭毛素作为一种病原相关分子模式（PAMP）诱导水稻免疫反应（PTI）的作用机理，采用机械震荡、丙酮沉淀以及离子交换层析进行了蛋白提纯，并用DAB染色法对其诱导水稻产生H₂O₂的能力进行了测定。结果表明，上述提纯方法的组合使用有效地提纯了分子量约为45kD的鞭毛素，经浸润接种处理后诱导了水稻叶组织 H₂O₂ 的产生。因此，Aaa鞭毛素提纯蛋白可用于后续的水稻 PTI 机理分析。

牦牛HSFY基因的克隆及其结构分析

曾贤彬,王永,刘仲娜,马志杰,海汀,钟金城

2013, 0(7): 82-88.

摘要 ( 257 )

PDF (4026KB) ( 1000 )

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Y染色体上的热休克转录因子（HSFY）是精子发生障碍的候选基因之一。通过克隆牦牛HSFY基因，并与普通牛Y染色体上的84条HSFY序列比对。结果表明：牦牛HSFY基因由2个外显子和1个内含子组成，与普通牛基因组中的相应序列的一致性高达99.54%。牦牛、普通牛的该基因具有4处插入/缺失，且序列与其相邻序列极为相似。在1 012-1 020 bp（Ⅰ）处有AAAGAAGA/TG等9个核苷酸缺失，位于内含子内；在1 071-1 073 bp（Ⅱ）、1 249-1 251 bp（Ⅲ）处分别有AAG、CCA/C等3个核苷酸缺失，位于第二外显子内，分别导致赖氨酸和组氨酸的缺失；在1 708-1 710 bp（Ⅳ）处有CAA 3个核苷酸缺失，位于3'末端非编码区。在普通牛的84条HSFY基因序列中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ插入/缺失分别有29、3、2、1次。未发现Ⅱ、Ⅲ同时缺失的拷贝，但Ⅱ、Ⅲ缺失均伴有Ⅰ缺失，且导致了蛋白三维结构的变化。牦牛HSFY是在睾丸中表达的多拷贝基因，经密码子偏好性分析，该基因编码的蛋白质偏好使用以A或T结尾的密码子。

绒山羊DBY基因的BAC筛选与序列分析

肖红梅,肖旭,刘志红,李金泉

2013, 0(7): 89-93.

摘要 ( 243 )

PDF (2574KB) ( 1036 )

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绒山羊是我国一种独特的生物资源，是经过长期的自然选择和人工选育而成的目前世界上产绒量最高、绒纤维品质最好的品种，所以提高绒山羊的繁殖力，对经济的发展有着非常重要的意义。运用PCR技术，对绒山羊Y染色体上控制精子生成的DBY基因进行BAC文库筛选、克隆、鉴定、测序，得到240 bp的DBY基因片段。与GenBank收录的其他物种进行序列比对，结果显示，与绵羊序列的同源性达96%，与坡鹿、水牛的同源性达93%；与猪鹿、瘤牛和牛的同源性分别达92%和91%；而与人和黑猩猩及小鼠的序列无同源性，共编码52个氨基酸。物种间NJ的聚类结果与其在系统分类学的地位相一致。

鸡胚胎干细胞的体外培养和鉴定

何文俊,刘红,叶玲玲,李世崇,王启伟,陈昭烈

2013, 0(7): 94-98.

摘要 ( 363 )

PDF (2012KB) ( 1216 )

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从鸡X期胚胎中分离胚盘细胞，以小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts，MEF）为滋养层，高糖DMEM为基础培养基并添加10 ng/mL bFGF、20 ng/mL hIGF-1、2 ng/mL mSCF、2 ng/mL hIL-11和1 000 U/mL LIF等细胞因子对细胞进行培养，获得典型的呈集落生长的鸡胚胎干细胞（chicken embryonic stem cells，cESCs）克隆。免疫组化显示，呈集落生长的cESCs克隆具有较高的内源性AKP活性并表达多能性标志SSEA-1和Oct-4。RT-PCR分析进一步证实其表达cESCs特异性基因cENS-1。结果表明，该培养体系可用于cESCs的分离并维持其在体外生长并保持未分化状态。

虹鳟MHC-UBA基因遗传多样性分析

胡丹丹,刘哲,邵淑娟,杨娟,王建福

2013, 0(7): 99-106.

摘要 ( 270 )

PDF (2447KB) ( 957 )

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主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex，MHC）是存在于脊椎动物体内，与免疫功能密切相关的高度多态性基因群，也是研究适应性进化过程的最佳候选基因之一。采用PCR-SSCP及克隆测序的方法分析了184尾虹鳟MHCⅠ类UBA基因第2外显子的遗传多样性。结果共检出12个等位基因，其中有11个为首次发现。单个个体最多存在4种等位基因，预示虹鳟UBA基因可能存在2个以上拷贝位点。12种等位基因同源性在98.08%-99.23%之间，核苷酸变异位点百分率6.13%，氨基酸变异位点百分率17.44%。抗原肽结合区（PBR）和非抗原肽结合区（non-PBR）的非同义替换率（d _N）均显著大于同义替换率（d_S）（P<0.001），说明虹鳟UBA基因在进化过程中受到正向选择的作用。氨基酸组分和密码子使用偏性分析表明各同义密码子使用频率不均衡。系统发育分析结果显示，虹鳟UBA基因与大西洋鲑UBA基因亲缘关系较近。研究结果表明，虹鳟UBA基因具有丰富的遗传多样性，可望作为抗病育种应用中的一个潜在遗传标记。

五条蚋（Simulium quinquestriatum）不同地理种群遗传多样性的ISSR标记研究

修江帆,张春林,陈汉彬

2013, 0(7): 107-113.

摘要 ( 237 )

PDF (2357KB) ( 966 )

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为阐明五条蚋（S. quinquestriatum）不同地理种群的遗传多样性，应用ISSR技术对我国五条蚋8个地理种群的遗传多样性及其分化进行了研究分析。构建了中国五条蚋8个种群160个体的ISSR指纹图谱。8条引物扩增出111条ISSR条带，其中96条为多态性条带，占总扩增条带数的86.47%，每个种群显示了各自独特的ISSR图谱。ISSR标记的遗传多样性分析结果表明：五条蚋在物种水平表现出较高的遗传多样性（P=86.4%，A=1.991 0±0.094 9，A_E=1.553 2±0.334 5，H=0.323 1±0.157 9，I=0.484 7±0.203 7）；在种群水平表现出较低的遗传多样性（P=78.37%，A=1.492 1±0.499 7，A_E=1.316 6±0.370 0，H=0.180 1±0.206 6，I=0.265 5±0.295 0）；分子方差（AMOVA）分析结果表明五条蚋种群间的遗传分化为59%，种群内部的遗传分化程度为41%；种群间的遗传分化系数（G_st）为0.59，种群间基因流（N_m）为0.347 5。说明五条蚋不同地理种群间遗传分化程度高，地理屏障（高山和平原等）以及栖息地片段化是导致其遗传分化形成的主要因素。

三角帆蚌（Hyriopsis cumingii）Perlucin蛋白原核表达条件的优化及表达产物的鉴定

林静云,白志毅,李家乐

2013, 0(7): 114-118.

摘要 ( 251 )

PDF (3865KB) ( 999 )

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采用PCR方法从三角帆蚌外套膜cDNA中扩增perlucin基因的开放阅读框，连接到pET-28a表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达重组融合蛋白pET-28a-Hcperlucin。通过优化培养温度、IPTG 浓度以及诱导时间，得出重组融合蛋白的最佳表达条件分别为：37℃、0.1 mmol/L IPTG、6 h。重组融合蛋白主要以包涵体形式存在。SDS-PAGE和Western blot分析结果表明，表达重组融合蛋白的相对分子量与预测值相符，约为21 kD，并能与鼠抗His-tag单克隆抗体进行特异性结合，表明重组融合蛋白构建成功。

一株抗多重耐药菌海洋放线菌的筛选及其活性分析

陈美群，冯广达,邓名荣,朱红惠

2013, 0(7): 119-124.

摘要 ( 290 )

PDF (1666KB) ( 1126 )

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旨在从71株海洋放线菌中筛选活性较好的抗多重耐药菌菌株。采用平板打孔抑菌法筛选对多重耐药菌的抑制作用；通过菌株形态学特征、生理生化特征和16S rDNA序列对菌株进行分类鉴定。结果显示，筛选到一株对多株多重耐药菌均有较强抑制作用的海洋放线菌MQ-86，菌株MQ-86的M ₂⁺培养基粗提物对普通的大肠杆菌（Escherichia coli）8739、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）6538、白色念珠菌（Candida albicans）10231和共耐18种主要抗生素的多重耐药性大肠杆菌（Escherichia coli）480、大肠杆菌（Escherichia coli）460、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）206都有较好的抑制效果。菌株MQ-86对多株多重耐药菌均具有较强的抑制活性，经初步鉴定为小链霉菌（Streptomyces parvus）。

一株氨基半乳糖产生菌的筛选鉴定及培养条件研究

张荣岭,王瑞明,李丕武

2013, 0(7): 125-130.

摘要 ( 303 )

PDF (3302KB) ( 990 )

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从东营黄河口湿地一处富含鱼蟹腐烂物的淤泥中分离筛选获得一株产氨基半乳糖的细菌YR06。根据形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析，鉴定该菌株为嗜水气单胞菌。通过对该菌株摇瓶发酵进行的单因素试验和正交试验，优化得到培养基成分及培养条件：果糖10 g/L，尿素15 g/L，Na ₂HPO₄ 15 g/L，CaCl₂ 22.2 g/L，MgSO₄ 0.18 g/L，KH_{2PO₄ 5 g/L；发酵液初始pH6.5，装液量为60 mL/250 mL，温度为33℃，培养时间14 h。在此条件下氨基半乳糖产量达128 mg/L。}

一株高产糖化酶生产菌的筛选与鉴定

张文丽,于寒松,朴春红,胡鑫,王舒婷,胡耀辉

2013, 0(7): 131-135.

摘要 ( 378 )

PDF (2009KB) ( 949 )

参考文献 | 相关文章 | 计量指标

从吉林某豆制品加工厂污水排放口处的土样中，采用稀释平板法从中分离筛选得到一株高产糖化酶菌株ZWL-1（18S rDNA基因的 GenBank 登录号：KC433410）。在进行形态观察的基础上，结合18S rDNA序列分析并建立系统发育树进一步对该菌进行了种类鉴定。18S rDNA序列分析表明，菌株ZWL-1与黑曲霉（Aspergillus niger）的18S rDNA的同源性均在99.0%以上；从构建的系统进化树中可以看出，ZWL-1与Aspergillus sp. LQ21共同构成一个分支，并与黑曲霉（Aspergillus niger strain CS1-1）聚成一大支，最终确定该菌株为黑曲霉。

大肠杆菌UDP-葡萄糖脱氢酶基因的克隆、表达及酶活性测定

陈奕涵,钱悦,侯永泰,周庆玮,甘人宝,管世敏,荣绍丰

2013, 0(7): 136-143.

摘要 ( 415 )

PDF (2646KB) ( 1440 )

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UDP-葡萄糖脱氢酶（UDP-GlcDH）是透明质酸合成过程中关键的限速酶，可以将UDP-葡萄糖催化生成透明质酸必需的前体物质UDP-葡萄糖醛酸。分别采用大肠杆菌BL21（DE3）和YK537的基因组DNA为模板，通过PCR获得BL21（DE3）和YK537的UDP-GlcDH基因ugd，并采用分子生物学方法分别将两种菌株的ugd基因插入含有P _L启动子的pBLMVL2载体中，分别获得重组质粒pBLBugd和pBLYugd，再分别转化于大肠杆菌BL21（DE3）和YK537中，获得4株重组菌；采用升温诱导表达UDP-GlcDH，并测定不同重组菌株的UDP-GlcDH的活性，探索出不同温度诱导条件下UDP-GlcDH的表达量及活性差异。结果表明，采用双阶段升温诱导方式并添加适量酵母粉可以显著提高重组菌表达UDP-GlcDH的活性。

鳗鲡病原性气单胞菌外膜蛋白基因全长的克隆与抗原决定簇分析

郭松林,王玉,关瑞章,冯建军,林鹏,杨求华

2013, 0(7): 144-152.

摘要 ( 248 )

PDF (2462KB) ( 957 )

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为寻找存在于鳗鲡病原性气单胞菌间的共同外膜蛋白保护性抗原。通过NCBI/GenBank数据库检索，找出气单胞菌多种外膜蛋白的序列信息，经比对后找到一条高度保守的基因序列片段。据相应片段从嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）和杀鲑气单胞胞菌（A. salmonicida）的全基因组序列中钓出Ⅱ型孔蛋白基因的全长序列及该基因区域之外两端的序列。根据嗜水气单胞菌和杀鲑气单胞胞菌这两端序列的保守区域设计一对特异性引物，用该引物扩增到鳗鱼病原库30株气单胞菌中11株菌的Ⅱ型孔蛋白基因全长，经测序后获得10株菌的Ⅱ型孔蛋白基因全长序列。选择遗传距离居中菌株，对该基因推导的表达产物进行蛋白结构预测、亲水性和抗原决定簇分析后发现，这些蛋白均具有三级结构，亲水性强且具有丰富的抗原决定簇。不同菌株的多个抗原决定簇经比对分析后，寻找到存在于多株鳗鲡病原性气单胞菌间的6个保守抗原决定簇。为养殖鳗鲡病原菌外膜蛋白共同保护性抗原的基因工程疫苗研究奠定了理论基础。

中国恒河猴肠道菌群特征揭示

赵娜,刘社兰,路纪琪,何宏轩,赵宝华

2013, 0(7): 153-160.

摘要 ( 270 )

PDF (2675KB) ( 1429 )

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运用变性梯度凝胶电泳（DGGE）和实时荧光定量（q-PCR）技术分析6个年龄组恒河猴粪便样品中主要细菌情况，揭示肠道微生态特点。16S rRNA基因V3可变区PCR-DGGE指纹图谱显示条带丰富，割胶62条，克隆测序后与GenBank序列进行比对后构建进化树显示所有62个条带、43个OTUs属于4个门：厚壁菌门，放线菌门，拟杆菌门以及螺旋体门。PCR-DGGE图谱泳道相似性分析及主成分分析（PCoA）显示婴幼龄组和孕期组聚类明显。Q-PCR结果显示梭菌属细菌和双歧杆菌最为丰富，肠球菌属最少。梭菌属clusters ⅪⅤ，肠球菌属和拟杆菌-普氏菌属组间差异明显（P＜0.01）。作为显示肠道健康水平标准的双歧杆菌和肠杆菌比值（B/E值）与同龄恒河猴相比，在孕期恒河猴组有明显的降低（P<0.01）。婴幼龄组和孕期组特点相似属首次发现。

苹果轮纹病菌的多基因联合鉴定

贾广成,周增强,侯珲,王丽,朱建兰

2013, 0(7): 161-166.

摘要 ( 262 )

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从不同的苹果种植区采集10株苹果轮纹病菌，鉴定苹果轮纹病菌和明确苹果轮纹病菌的主要致病基因的存在状况，利用PCR技术对苹果轮纹病菌的基因间隔序列（Internal transcribed spacer， ITS）、基因延伸因子1（Elongation factor 1α，EF-1α）和微管蛋白B（Beta tubulin，β-tubulin）片段进行扩增并测序。结果表明，苹果轮纹病的病原菌是Botryosphaeria dothidea，苹果轮纹病菌的基因组中有致病相关的EF-1α基因和β-tubulin基因。微管蛋白和转录因子可能参与苹果轮纹病的侵染过程，在苹果轮纹病的致病过程中可能起着重要的作用。

CPA-核酸试纸条快速检测霍乱弧菌方法的建立与优化

秦强,朱金玲

2013, 0(7): 167-171.

摘要 ( 279 )

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用交叉引物恒温扩增技术（Cross priming amplification，CPA）和核酸试纸条检测方法（Nucleic acid test strip detection methord）快速检测霍乱弧菌。根据霍乱弧菌的MDH基因序列设计特异性的引物和探针，通过对反应体系与反应条件进行优化，确立最佳反应体系，并将CPA方法与PCR法进行比较与评价。对霍乱弧菌的检测具有高度特异性，对霍乱弧菌的检出极限达到了6×10 ² CFU/mL，高于PCR，而且具有较好的稳定性。交叉引物恒温扩增技术（Cross priming amplification，CPA）-核酸试纸条检测方法（Nucleic acid test strip detection methord）是一种特异、灵敏、快速、简便的霍乱弧菌的检测方法。

不同抑制剂对谷氨酸棒状杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶酶活的影响

吴新阳,裴广胜,郑小梅,曹国强,刘娇,郑平,王敏,孙际宾

2013, 0(7): 172-178.

摘要 ( 308 )

PDF (2834KB) ( 1241 )

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磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（Phosphoenolpyruvate carboxylase，PPC）是生物体碳代谢四碳回补途径的重要酶，是很多生物基化学品合成途径中的关键反应。为揭示谷氨酸棒状杆菌的PPC酶受体内代谢物影响的情况，对谷氨酸棒状杆菌Corynebacterium glutamicum ATCC13032的ppc基因进行了PCR克隆，成功地在大肠杆菌中诱导表达为可溶性蛋白。利用Ni柱亲和层析纯化了该蛋白，酶活性测定表明其具有磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性。细致研究了各种抑制剂，如柠檬酸、异柠檬酸、富马酸、琥珀酸、苹果酸、谷氨酸、天冬氨酸等对PPC酶活的影响，证实天冬氨酸和苹果酸是谷氨酸棒杆菌PPC的强抑制剂，并首次发现PPC也受到N-乙酰谷氨酰胺的抑制作用。

T7噬菌体表达载体的组氨酸改造及应用

樊江平,钟理,董晓民,张旭胐,王志强

2013, 0(7): 179-183.

摘要 ( 375 )

PDF (3616KB) ( 1147 )

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利用基因重组技术，对已有载体T7 Select10-3b进行改造，得到被组氨酸标签标记（His-Tag）的新型表达载体，并利用该载体构建cDNA文库，为后期开放阅读框的筛选提供更为简便有效的方法。以T7 Select10-3b载体为出发材料，将复性得到组氨酸标签表达序列插入其多克隆位点处。再利用包装蛋白包装重组DNA，得到有侵染活性的重组T7噬菌体。用该载体构建乳腺癌cDNA文库，过镍柱，筛选开放阅读框（open reading frame，ORF），计算ORF重组率。测序结果显示该标签已经成功插入，化学发光免疫检测显示该标签在T7中表达。重组T7噬菌体文库的ORF筛选率由筛选前的5.6%提高到82%。T7噬菌体中插入的His标签对提高cDNA文库中ORF的重组率具有重要意义。

海南产T-超家族芋螺毒素B8.1T合成及活性分析

吴勇,吴潇洒,长孙东亭,罗素兰

2013, 0(7): 184-188.

摘要 ( 292 )

PDF (2032KB) ( 820 )

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从海南产桶形芋螺中发现了一个新的T-超家族芋螺毒素B8.1T，其氨基酸序列为DCCPESPPCCH，具有两对二硫键，其连接方式为Cys2-Cys9，Cys3-Cys10。首先采用N-9-芴甲氧羰基（Fmoc）固相合成法合成了B8.1T线性肽，根据采用半胱氨酸保护基团的不同，探索了3种不同的氧化方法：（1）两步氧化法；（2）One-pot方法；（3）自由氧化法。同时对提高芋螺毒素氧化折叠效率的条件进行了优化，对B8.1T的生物活性进行了初步的研究。结果表明，3种方法都可合成正确折叠的芋螺毒素B8.1T，其中两步氧化法和One-pot法合成效率高于自由氧化法，自由氧化折叠条件的优化表明，折叠反应添加物等能提高正确折叠产物的积累效率。B8.1T的动物活性试验显示，当对小鼠进行颅内给药时，对其行为活动产生抑制效应，而对肌肉给药的金鱼无明显影响。

ANKIB1的克隆、原核表达和纯化

谢云飞,杨子善,马振玲,解博红,刘世饶

2013, 0(7): 189-194.

摘要 ( 312 )

PDF (3146KB) ( 811 )

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含锚蛋白重复序列和IBR结构域蛋白1（ANKIB1）含有RING-IBR-RING结构域、ANK模体和泛素结合模体，可能具有E3泛素连接酶活性和特殊的催化机制，但其功能目前所知甚少。采用巢式PCR技术分段扩增了人ANKIB1基因的cDNA，并通过基因重组构建了全长ANKIB1基因的完整编码序列。将ANKIB1连接到原核表达载体pGEX-5X-3中，用于表达GST-ANKIB1融合蛋白。在含有RING型蛋白稳定剂ZnCl ₂的培养基中，转化pGEX-5X-ANKIB1的大肠杆菌BL21（DE3）经过0.1 mmol/L IPTG在15℃低温条件下诱导10 h，成功表达了分子量高达148.5 kD的可溶性GST-ANKIB1蛋白。利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析，纯化了GST-ANKIB1融合蛋白。

呼吸道感染防治疫苗中国专利申请分析

朱宁

2013, 0(7): 195-196.

摘要 ( 171 )

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