小鼠Dnmt1启动子荧光素酶报告基因的构建及活性分析

生物技术通报 ›› 2013, Vol. 0 ›› Issue (10): 109-112.

小鼠Dnmt1启动子荧光素酶报告基因的构建及活性分析

张远¹,杨旬旬², 吴风瑞^2,3, 刘勇^2,3, 丁彪^2,3, 王彩红², 黄继昌², 李文雍^2,3

（1. 安徽农业大学生命科学学院，合肥 230036 ；2. 胚胎发育与生殖调节安徽省重点实验室，阜阳 236037 ； 3. 阜阳师范学院生命科学学院，阜阳 236037）

收稿日期:2013-04-11 修回日期:2013-10-15 出版日期:2013-10-14 发布日期:2013-10-15
作者简介:张远，女，硕士研究生，研究方向：胚胎发育的分子机制；E-mail ：zhangyuan4091470@hotmail.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31071310，31201789），安徽省教育厅高等学校自然科学研究重点项目（KJ2013A202）

Construction and Analysis of Luciferase Reporter Vectors of Mouse Dnmt1 Gene Promoter

Zhang Yuan¹,Yang Xunxun², Wu Fengrui²,，³, Liu Yong²,，³, Ding Biao²,，³, Wang Caihong², Huang Jichang², Li Wenyong²,，³,

（1. College of Life Science，Anhui Agricultural University，Hefei 230036 ；2. Key Laboratory of Embryo Development and Reproductive Regulation，Anhui Province，Fuyang 236037 ；3. College of Life Science，Fuyang Normal University，Fuyang 236037）

Received:2013-04-11 Revised:2013-10-15 Published:2013-10-14 Online:2013-10-15

摘要/Abstract

摘要：

为研究小鼠Dnmt1 基因启动子5' 端缺失片段活性，以小鼠基因组DNA 为模板，通过聚合酶链式反应（PCR）扩增4 条不同长度的小鼠Dnmt1 基因启动子5' 端系列缺失片段，双酶切后克隆入pGL3-Basic 荧光素酶报告基因载体，构建Dnmt1 启动子-pGL3-Basic 重组质粒。随后经脂质体转染入NIH/3T3 细胞并检测各缺失片段荧光素酶活性。结果表明，成功构建Dnmt1 启动子5' 端系列缺失片段-pGL3-Basic 荧光报告基因重组质粒。经双荧光素酶报告基因检测后发现，所有的重组质粒均表现出荧光素酶活性，且最长缺失片段Dnmt1-1-pGL3-Basic 活性最强，约为其他的3 倍左右。结果初步证明小鼠Dnmt1 启动子在-1 866-+57 bp 区域具有较强转录活性。

关键词: 小鼠, Dnmt1启动子, NIH/3T3 细胞系, 活性分析

Abstract:

To study the different 5'-flanking regions activity of mouse Dnmt1 gene, 4 truncated Dnmt1 promoters were amplified by polymerase chain reaction（PCR）from mouse genomic DNA and subcloned into pMD19-T vector, and then cloned into the pGL3-Basic luciferase reporter gene vector to construct Dnmt1 promoter-pGL3-Basic recombinants. After the recombinants were transfected into NIH/3T3 cells with Lipofectamine, relative luciferase activity were obtained by using the Dual-Luciferase Reporter Assay System and Glomax. Results showed that the recombinants of 5'-flanking sequential deletion of mouse Dnmt1 promoter-pGL3-Basic reporter gene were successfully constructed. The relative luciferase activity of Dnmt1-1-pGL3-Basic was three times higher than the other three truncated constructs. Together, this study was preliminary confirmed that the mouse Dnmt1 promoter region（-1 866-+57 bp）had strong transcriptional activity.

Key words: Mouse, Dnmt1 promoter, NIH/3T3 cell line, Activity analysis

张远,杨旬旬,吴风瑞,刘勇,丁彪,王彩红,黄继昌,李文雍. 小鼠Dnmt1启动子荧光素酶报告基因的构建及活性分析[J]. 生物技术通报, 2013, 0(10): 109-112.

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