日本榧原生质体的分离与纯化

摘要/Abstract

摘要： 日本榧原生质体的分离与纯化对于建立日本榧悬浮细胞无性系，从而获得次生代谢产物榧黄素等具有重要的经济价值。以日本榧一年生以及当年生叶片为分离材料，采用酶解法成功获得了完整的原生质体。试验结果表明，日本榧叶片细胞原生质体获得的最适酶浓度为：CPW+纤维素酶(Cellulase R-10)3.0%-6.0%、离析酶(Macerozyme R-10)5.0%-6.0%。原生质体的纯化使用蔗糖浓度为30%-44%。日本榧原生质体在0.7 mol/L甘露醇+50 mmol/L MES+0.5% PVP等渗液中做连续培养可以保持完整的细胞形态。

关键词: 日本榧, 原生质体, 分离, 纯化

Abstract: Isolation and purification of protoplast cell from the leaves of T.nucifera may exert great economic value for further suspension construction of somatic asexual cell and obtain secondary metabolites-kayaflavone. Enzyme methods was used to isolate the cell of T.nucifera leaf as materials successfully obtained protoplasts. The results showed that the suitable concentration for protoplast cells were：CPW+Cellulase(R-10)3.0%-6.0% and Macerozyme(R-10)5.0%-6.0%. The concentration 30%-44% sucrose obtained was employed for cell centrifugation in protoplast purification. The purified protoplast could keep on well-growth status for sustainable culture in the medium with 0.7 mol/L mannitol+50 mmol/L MES+0.5% PVP.

Key words: Torreya nucifera, Protoplasts, Isolation, Purification

张云璇, 苗积广, 谢明春, 田松, 董明哲, 姜国勇. 日本榧原生质体的分离与纯化[J]. 生物技术通报, 2013, 0(11): 75-78.

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