三种食源性致病菌的多重PCR快速检测及应用

生物技术通报 ›› 2014, Vol. 0 ›› Issue (7): 64-68.

三种食源性致病菌的多重PCR快速检测及应用

余倩, 黄梦娜

仲恺农业工程学院轻工食品学院, 广州 510225

收稿日期:2014-01-06 出版日期:2014-07-15 发布日期:2014-07-16
作者简介:余倩, 女, 博士, 副教授, 研究方向：应用微生物；E-mail：yuqianchina@126.com
基金资助:
广东省科技计划项目（2011B031500023）

Detection and Application of Three Food-borne Bacterial Pathogens by Multiplex PCR

Yu Qian, Huang Mengna

Zhongkai University of Agiculture and Engineering, Guangzhou 510225

Received:2014-01-06 Published:2014-07-15 Online:2014-07-16

摘要/Abstract

摘要： 针对常见的3种食源性致病菌肠出血性大肠杆菌O157:H7 的rfbE基因、金黄色葡萄球菌的nuc基因及沙门氏菌的hilA基因, 使用Primer 5.0软件设计出相对应的特异性引物, 预计PCR产物的分子大小为287、354及468 bp。通过单一、双重及三重PCR对样品进行检测, 并对人工感染的鲜奶进行检测。结果表明, 3 种食源性致病菌的单一、双重和三重PCR 均能成功扩增出与预计大小一致的片段, 无非特异性扩增。人工感染食品的PCR 检测也获得了目的菌的特异性片段, 并且结果稳定。这说明此3对引物可分别用于3个菌靶基因的PCR检测。

关键词: 食源性致病菌, 肠出血性大肠杆菌O157:H7, 金黄色葡萄球菌, 沙门氏菌, PCR

Abstract: Food poisoning incidents have occurred by the pollution of food-borne pathogenic bacteria frequently. PCR meet the requirements of the rapid detection of pathogenic bacteria. The three primers was designed by primer 5.0 software of Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 rfbE gene, Staphyloccocus aureus nuc gene, Salmonella hilA gene. Three amplified segments of rfbE gene, nuc gene, hilA gene were 287 bp, 354 bp, 468 bp. The specificity and sensitivity of primers were verified by single, duplex and triplex-PCR reaction, and by detecting the foods artificially infected with the three pathogens. The results showed that three food-borne bacterial pathogens were amplified purpose fragments, and no non-specific fragments were amplified. It was obvious that there were the special fragments of the artificial food infected with three pathogens by PCR test. The three primers could be used for PCR detection of target genes about three bacteria.

Key words: Food-borne pathogenic bacteria, Enterohemorrhagic, Escherichia coli O157:H7 , Staphyloccocus aureus Salmonella PCR

余倩, 黄梦娜. 三种食源性致病菌的多重PCR快速检测及应用[J]. 生物技术通报, 2014, 0(7): 64-68.

Yu Qian, Huang Mengna. Detection and Application of Three Food-borne Bacterial Pathogens by Multiplex PCR[J]. Biotechnology Bulletin, 2014, 0(7): 64-68.

参考文献

[1] 史贤明, 刘慧, 刘烈刚, 等.食品安全与卫生学［M] .北京：中国农业出版社, 2013：30-48.
[2] 苏莉莉.从食源性疾病的发生看食品安全的重要性[J]. 中国医药指南, 2007（4）：115-118.
[3] 姚敬业, 金庆.1996年发生在日本的肠出血性大肠杆菌O157H7食物中毒[J].安徽预防医学, 2000, 6（1）：79-80.
[4] 金连梅, 李群. 2004-2007年全国食物中毒事件分析[J].疾病监测, 2009, 6（24）：459-462.
[5] 刘雨潇, 刘士敏, 王民, 等.分子生物学方法在食品微生物检测中的应用[J].生物技术通讯, 2009, 20（3）：451-452.
[6] 翁思聪, 朱军莉, 励建荣.水产品中4种常见致病菌多重PCR检测方法的建立及评价[J]. 水产学报, 2011（2）：305-314.
[7] Li J, Qi SX, Zhang C, et al. A Two-tube multiplex reverse transcrip-tion PCR assay for simultaneous detection of sixteen human respira-tory virus types/subtypes[J]. Biomed Research International, 2013, 327620.
[8] 王慧, 朱瑞良, 谭燕玲, 等.多重PCR检测三种重要食源性致病菌方法的建立及应用[J]. 中国农业科学, 2011（11）：2334-2340.
[9] Chandler D, Wagnon C, Boltonh J. Reverse transcriptase（RT）in-hibition ofPCR at low concentrations of template and its implications for quantitative RT-PCR[J]. Appl Environ Microbiologic, 1998, 64（2）：669-672.
[10] 姜彦君, 都启晶, 赵宏坤.食源性致病菌多重PCR检测方法的建立与应用[J].中国食品学报, 2013（10）：162-169.
[11] 李丁玲, 任敬, 马晓燕, 等.多重PCR检测食源性致病菌的研究[J].食品工业, 2012（10）：159-163.
[12] Yang MJ, Luo L, Nie K, et al. Genotyping of 11 human papillomav-iruses by multiplex PCR with a GeXP analyzer[J]. J Med Virol, 2012（6）：546-560.
[13] 陈诺, 唐善虎, 岑璐伽, 等.多重PCR技术在食品微生物检测中的应用进展［A] .中国畜牧兽医, 2010, 37（10）：72-75.
[14] 平凡, 张守勇, 武盛.国内外乳品微生物限量标准的比较[J].乳品工业, 2006（8）：58-60.
[15] 范一灵, 潘峰, 史贤明.金黄色葡萄球菌分子检测技术的常用靶基因[J].微生物学杂志, 2003, 3（28）：72-76.
[16] 赵红庆, 苑锡铜, 黄留玉.多重PCR技术在病原检测中的应用[J].生物技术通讯, 2007, 18（5）：863-865.