基于诺丽叶片愈伤组织的细胞悬浮系的建立

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0871

生物技术通报 ›› 2018, Vol. 34 ›› Issue (5): 142-147.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0871

基于诺丽叶片愈伤组织的细胞悬浮系的建立

张正雪¹,蓝增全¹,吴田²

1. 西南林业大学环境科学与工程学院,昆明 650224;
2. 西南林业大学园林学院,昆明 650224

收稿日期:2017-10-18 出版日期:2018-05-26 发布日期:2018-06-07
作者简介:张正雪,女,硕士研究生,研究方向：森林生态,E-mail：1296564730@qq.com
基金资助:
云南省应用基础研究计划项目（2016FB049）,国家林业局推广项目（[2015]27）,国家星火计划（2014GA830017）

Establishment of Cell Suspension Culture System Based on the Leaf Callus in Noni

ZHANG Zheng-xue¹, LAN Zeng-quan¹, WU Tian²

1. College of Environment Science and Engineering Department,Southwest Forestry University,Kunming 650224;
2. College of Horticulture and Gardening,Southwest Forestry University,Kunming 650224

Received:2017-10-18 Published:2018-05-26 Online:2018-06-07

摘要/Abstract

摘要： 为通过诺丽叶片的细胞悬浮系来获得其次生代谢物。实验基于诱导的诺丽无菌苗叶片愈伤组织,改变液体培养基的激素组成、接种量以及在细胞悬浮培养过程中进行相关参数的测定以确定继代周期。液体培养基为MS+2.0 mg/L NAA+0.2 mg/L KT,最佳初始接种量为60 g/L;在14-22 d进入直线生长期,后缓慢增长,在第26 天细胞数量达到峰值11.8×10⁵个/mL后细胞数量下降;细胞活力最好出现在第21天,OD₄₈₅=1.8;初代细胞形态为不规则杆状细胞,在第6代呈规则小细胞团和圆球体;最佳继代周期22-26 d,诺丽叶片细胞悬浮培养液的细胞存活率为77.9%。实验建立了稳定的诺丽叶片细胞悬浮培养体系。

关键词: 海巴戟, 愈伤组织, 细胞活力, 生长曲线

Abstract: This work aims to get the secondary metabolites from the cell suspension culture system of Morinda citrifolia L.（noni）leaves. In the experiment,the cell suspension system of noni leaf was established based on the callus induced from the sterilized leaves and determination of the subculture cycle by changing the collocation of hormone in liquid medium and inoculation amount of callus,and measuring some relevant parameter with the process of the culture. Liquid medium was MS+2.0 mg/L NAA+0.2 mg/L KT.,and the initial inoculation amount of callus was 60 g/L. During the 14th -22nd d,cells were in the linear growth phase,then grew slowly,and reached a peak of 11.8×10⁵/mL at the 26th day,and then declined. The best cell viability appeared at 21st day when the OD₄₈₅=1.8. The primary cell was irregular rod-shaped and showed regular clusters of small cells and spheres when in the sixth generation. The best subculture cycle of noni cell suspension culture system was 22-26 d,and the cell survival rate in the liquid suspension culture of noni leaves was 77.9%. In conclusion,a stable cell suspension culture system of noni leaves is established in the experiment.

Key words: Morinda citrifolia L, callus, cell viability, growth curve

张正雪,蓝增全,吴田. 基于诺丽叶片愈伤组织的细胞悬浮系的建立[J]. 生物技术通报, 2018, 34(5): 142-147.

ZHANG Zheng-xue, LAN Zeng-quan, WU Tian. Establishment of Cell Suspension Culture System Based on the Leaf Callus in Noni[J]. Biotechnology Bulletin, 2018, 34(5): 142-147.

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基于诺丽叶片愈伤组织的细胞悬浮系的建立

Establishment of Cell Suspension Culture System Based on the Leaf Callus in Noni

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