猪圆环病毒2型Cap蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0205

生物技术通报 ›› 2019, Vol. 35 ›› Issue (8): 226-231.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0205

猪圆环病毒2型Cap蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

欧云文^1,2, 代军飞¹, 马炳¹, 张杰¹, 邓辉祥², 李潇², 张欣明²

1. 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州730046;
2. 开江县动物疫病预防控制中心,达州 636250

收稿日期:2018-03-12 出版日期:2019-08-26 发布日期:2019-08-05
作者简介:欧云文,男,硕士研究生,研究方向：动物传染病学;E-mail：oyw813@163.com
基金资助:
“十三五”国家重点研发计划子课题（2017YFD0501801）,四川省科技计划项目（2019GDRC0110）

Preparation and Identification of Polyclonal Antibody Against the Cap Protein of Porcine Circovirus Type 2

OU Yun-wen^1,2, DAI Jun-fei¹, MA Bing¹, ZHANG Jie¹, DENG Hui-xiang², LI Xiao², ZHANG Xin-ming²

1. State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Lanzhou 730046;
2. Animal Disease Prevention and Control Center of Kaijiang County,Dazhou 636250

Received:2018-03-12 Published:2019-08-26 Online:2019-08-05

摘要/Abstract

摘要： 旨在制备猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白的多克隆抗体。以PCV2毒株（CAU0673）DNA为模板进行PCR,扩增目的片段大小约为702 bp,构建pET30a-PCV2-Cap重组质粒,转入大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达;对目的蛋白进行Ni-NTA树脂亲和层析纯化、复性,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;将纯化后的重组Cap蛋白与弗氏佐剂混匀乳化,经背部皮下多点注射4次,免疫新西兰大耳白兔,制备成兔抗Cap蛋白多克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验（IFA）验证兔抗血清特异性,并用间接ELISA测定抗血清抗体效价。PCR、双酶切和测序鉴定结果表明,重组质粒pET30a-PCV2-Cap构建正确;重组Cap蛋白以包涵体的形式表达,大小约为34 kD,复性后重组Cap蛋白可与PCV2阳性猪血清发生特异性反应;制备的多克隆抗体与PCV2重组Cap蛋白和全病毒抗原均可发生反应,ELISA抗体效价>1∶12 800,显著高于商品化疫苗组。

关键词: 猪圆环病毒2型, Cap蛋白, 多克隆抗体, 鉴定

Abstract: This experiment was aimed to prepare polyclonal antibodies of Cap protein of porcine circovirus type 2（PCV2）. The gene was amplified from the DNA of PCV2 CAU0673 strain by PCR,whose product was approximately 702 bp. The recombined plasmid pET30a-PCV2-Cap was expressed in E.coli BL21（DE3）and was induced by IPTG. The recombinant Cap protein was purified by Ni-NTA,and used as an immunogen for immunization of New Zealand white rabbits by subcutaneous injection in several sites on back to prepare polyclonal antibodies. The specificity of the serum antibody was determined by western blot,IFA,and the serum antibody titer was detected by indirect ELISA. PCR,digestion and sequencing were used to identify positive plasmid. The results showed that the recombined plasmid pET30a-PCV2-Cap was successfully constructed. The results of SDA-PAGE showed that the recombined protein was successfully expressed in E.coli BL21;（DE3）with a relative molecular weight of 34 kD,mainly existed in a form of inclusion body. The results of western blot showed that this recombined Cap protein was specifically reacted with PCV2 positive pig serum. The prepared rabbit antisera was specifically reacted with the recombined Cap protein and whole virus antigen,and the serum antibody titer was 1∶12 800.

Key words: Porcine circovirus type 2, Cap protein, polyclonal antibody, identification

欧云文, 代军飞, 马炳, 张杰, 邓辉祥, 李潇, 张欣明. 猪圆环病毒2型Cap蛋白多克隆抗体的制备及鉴定[J]. 生物技术通报, 2019, 35(8): 226-231.

OU Yun-wen, DAI Jun-fei, MA Bing, ZHANG Jie, DENG Hui-xiang, LI Xiao, ZHANG Xin-ming. Preparation and Identification of Polyclonal Antibody Against the Cap Protein of Porcine Circovirus Type 2[J]. Biotechnology Bulletin, 2019, 35(8): 226-231.

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猪圆环病毒2型Cap蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

Preparation and Identification of Polyclonal Antibody Against the Cap Protein of Porcine Circovirus Type 2

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