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新基因PRR11的克隆、原核表达及鉴定

崔涛;兰欢;杜刚;刘革力;易发平;卜友泉;宋方洲;   

  1. 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室;重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心;
  • 出版日期:2009-03-26 发布日期:2009-03-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(30801356、30871237、30872758);; 重庆市科委自然科学基金(2007BB5302);; 重庆医科大学重点课题(XBZD200707)

  • Published:2009-03-26 Online:2009-03-26

摘要: 克隆新基因PRR11的开放阅读框区,构建其原核表达载体,并进行表达检测及鉴定。以Hela细胞cDNA为模板,RT-PCR扩增PRR11基因,克隆入原核表达载体PET-28a中,酶切、测序鉴定确认获得PRR11基因的重组原核表达载体PET-28a-PRR11。然后把PET-28a-PRR11重组载体转化到BL21中,经IPTG诱导蛋白表达,提取细胞蛋白并采用SDS-PAGE和蛋白质免疫印迹法检测目的蛋白的表达情况。结果表明成功扩增了PRR11基因,双酶切、测序鉴定证实目的基因成功克隆到原核表达载体PET-28a中,目的蛋白成功表达。成功构建的PRR11基因的原核表达载体,及PRR11的重组蛋白表达产物,为进一步研究PRR11的基因功能奠定了基础。

关键词: PRR11基因, PET-28a, 原核表达