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人gdnf基因的克隆及牛β-酪蛋白基因座定位整合载体的构建

张学明;罗奋华;苏慧敏;吴应积;   

  1. 内蒙古大学哺乳动物生殖与生物学技术教育部重点实验室;
  • 出版日期:2009-05-26 发布日期:2009-05-26
  • 基金资助:
    国家高科技“863”项目子课题(2005AA206110);; 内蒙古大学特聘教授科研启动费资助项目(203059)

  • Published:2009-05-26 Online:2009-05-26

摘要: 用分子克隆技术构建人gdnf基因打靶牛β-casein基因座的正负筛选打靶载体,用于制备生产人GDNF的牛乳腺生物反应器。打靶载体以牛β-casein基因上游和下游5.7 kb序列为5′和3′同源臂;neo抗性基因为正筛选因子;HSV-tk基因和DsRed2基因为双负筛选因子;人gdnf基因置于5′同源臂下游,SV40 polyA序列插入到人gdnf基因下游作为人gdnf基因转录终止信号。经PCR、限制性内切酶图谱及DNA测序分析鉴定,结果表明已成功地构建了人gdnf基因打靶牛β-casein基因座的正负筛选打靶载体,为研究人gdnf基因在牛β-casein基因座的定点整合及通过体细胞核移植法制备人GDNF牛乳腺生物反应器的研究奠定了基础。

关键词: 基因打靶, 人胶质细胞源性神经营养因子, 牛β-酪蛋白基因座, 载体