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洋葱黄矮病毒检测试剂盒的研制

贾玉成;韦传宝;   

  1. 安徽大学生命科学学院;安徽省植物生物技术实训中心;皖西学院化学与生命科学系;
  • 出版日期:2009-12-26 发布日期:2009-12-26
  • 基金资助:
    安徽省植物生物技术实训中心项目

  • Published:2009-12-26 Online:2009-12-26

摘要: 根据已报道的洋葱黄矮病毒(OYDV)序列设计引物,扩增洋葱黄矮病毒(OYDV)六安分离物外壳蛋白(CP)基因。序列同源性分析结果表明,与目前已报道的OYDV不同分离物CP基因核苷酸序列同源性为84.0%~95.8%,相应推测的氨基酸序列同源性为86.8%~97.6%。将CP基因插入原核表达载体pSBET后在大肠杆菌BL21(DE3)Plys S中诱导表达。通过12%SDS-PAGE和5%~20%梯度SDS-PAGE两次制备电泳纯化诱导产物,免疫家兔获得抗CP血清,Western blot分析对CP具有高度特异性。硫酸铵沉淀初步IgG,然后用Protein A-Red Sepharose亲和层析进一步纯化IgG,IgG与甘油1∶1混合获得效价1∶4800的一抗。将一抗、羊抗兔二抗和4-硝基苯基磷酸二钠组成OYDV检测试剂盒,可用于田间OYDV病样检测。

关键词: 韭葱黄条病毒, CP基因, 原核表达, 抗血清制备