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葡萄病毒B的RT-PCR检测技术研究

杨相昆;田海燕;牛建新;王林;代永欣;   

  1. 石河子大学农学院园艺系;新疆兵团绿洲生态农业重点实验室;新疆农垦科学院;
  • 出版日期:2010-05-26 发布日期:2010-05-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金资助项目(30060053,30360066);; 兵团科委项目(NKB02SDXNK01SW)

  • Published:2010-05-26 Online:2010-05-26

摘要: 旨在建立适合葡萄的葡萄病毒B的RT-PCR检测技术。从感染葡萄病毒B的葡萄皮层中提取总RNA,以其为模板合成cDNA第一链,并利用两对引物分别进行PCR扩增;回收PCR特异扩增产物,与pUCm-T载体连接,并进行转化、重组克隆的筛选、重组质粒的酶切鉴定和序列测定。结果显示,两对引物均能获得与预期片段大小一致长约460 bp和470 bp的扩增产物扩增片段序列与已报道GVB序列(序列号:X75448)的核苷酸同源性均为81%,经反复多次试验证实,利用总RNA为模板合成cDNA并进行PCR扩增检测GVB是准确、可靠的。

关键词: 葡萄病毒B, 检测, 重组质粒, 序列, 同源性