武夷菌素产生菌Fosmid文库的构建及文库探针的获得

武夷菌素产生菌Fosmid文库的构建及文库探针的获得

檀贝贝;孙蕾;张克诚;杨振娟;武哲;张俊;

中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室;

出版日期:2011-06-26 发布日期:2011-06-26
基金资助:
公益性行业科研专项资金项目(201103002);;中国农业科学院植物保护研究所中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(161014201 1004)

Published:2011-06-26 Online:2011-06-26

摘要/Abstract

摘要： 以不吸水链霉菌武夷变种CK-15为材料,提取基因组DNA,经Sau 3AⅠ部分酶切后回收35-40 kb之间的片段,连接到pCC1FOS载体上,经过包装转染涂布后构建得到了CK-15基因组的Fosmid文库,文库的滴度为8.8×10~5CFU/mL。随机挑取16个阳性克隆,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切电泳分析,样品插入片段平均长度大于35 kb,插入率为100%,符合构建文库的要求。根据多氧霉素、尼克霉素生物合成基因及大环内酯类聚酮合成酶基因(PKS)设计特异性引物,以基因组为模板进行PCR扩增,筛选特异性引物探针。结果用大环内酯类聚酮合成酶基因设计引物扩增出1 693 bp的片段经Blast比对其与大环内酯类抗生素生物合成基因相似性为95%以上。武夷菌素产生菌CK-15 Fosmid文库的构建及文库探针的获得,为武夷菌素生物合成基因的克隆奠定了基础。

关键词: 武夷菌素, 基因组, Fosmid文库, 文库探针

檀贝贝;孙蕾;张克诚;杨振娟;武哲;张俊;. 武夷菌素产生菌Fosmid文库的构建及文库探针的获得[J]. .

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