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pGEX-4T-1/Tα1-TP5原核表达载体的构建及表达

谢琦;林军;王凤山;   

  1. 桂林医学院生物技术学院;山东大学药学院生化与生物技术药物研究所;
  • 出版日期:2011-08-26 发布日期:2011-08-26

  • Published:2011-08-26 Online:2011-08-26

摘要: 旨在构建胸腺融合肽Tα1-TP5原核表达载体,并在大肠杆菌中表达。化学合成Tα1-TP5基因,与原核表达载体pGEX-4T-1融合并转化至E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE电泳和A lphaEase凝胶电泳图像分析系统对工程菌表达的蛋白进行分析鉴定。表达的GST融合蛋白经GST琼脂糖凝胶亲和层析和重组肠激酶切割后,电喷雾质谱(ESI-MS)鉴定胸腺融合肽Tα1-TP5。结果显示,成功构建pGEX-4T-1/Tα1-TP5原核表达载体,工程菌表达的GST融合蛋白占全菌总蛋白的27.8%,且主要以可溶形式表达。经ESI-MS鉴定,胸腺融合肽Tα1-TP5的分子量与理论值相符。胸腺融合肽Tα1-TP5在大肠杆菌中得到了高效表达。

关键词: 胸腺融合肽Tα1-TP5, GST-融合蛋白, pGEX-4T-1, 大肠杆菌, 原核表达