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HER2胞外段的克隆与原核表达

许银辉;郭晓芳;邬仙华;钱晨旭;罗磊;徐莲花;冯紫雅;张小影;   

  1. 新乡医学院第二临床学院;新乡医学院微生物教研室;新乡医学院临床医学院;新乡医学院医学检验系;新乡医学院三全学院;新乡医学院护理学院;
  • 出版日期:2012-08-26 发布日期:2012-08-26
  • 基金资助:
    新乡医学院大学生科研创新重点支助项目(DXSKYKT2010-001)

  • Published:2012-08-26 Online:2012-08-26

摘要: 应用RT-PCR技术从人乳腺癌细胞系SK-BR-3中克隆出人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factorreceptor 2,HER2)基因的胞外段,并插入到表达载体pET-30a中,得到重组表达载体pET30-HER2(Ex)。将该载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)细胞中,加入IPTG进行诱导表达,成功获得HER2胞外段蛋白。分别提取培养液上清、大肠杆菌周质腔、细胞质可溶性及不可溶性组分蛋白进行SDS-PAGE电泳分析,确定目的蛋白定位于大肠杆菌细胞质包涵体中。通过改变诱导温度、诱导物浓度、诱导起始菌体密度和诱导时间,寻找最佳表达条件,使目的蛋白的表达量达到最高。结果表明,在37℃下,OD600达到1.0时,经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导4 h,目的蛋白的表达量最高。将重组表达菌进行超声破碎,分离出包涵体组分,经Ni2+亲和层析纯化后获得了纯度>90%的HER2胞外段蛋白,从而为抗HER2抗体的制备及肿瘤疫苗的研究奠定了基础。

关键词: 人表皮生长因子受体2, 胞外结构域, 原核表达, pET-30a载体