人巨细胞病毒编码蛋白pUL23在E.coliBL21(DE3)中的表达和纯化

人巨细胞病毒编码蛋白pUL23在E.coliBL21(DE3)中的表达和纯化

李婧惠;刘明亮;李继东;张忠明;冉艳红;周天鸿;李弘剑;

暨南大学生命科学技术学院;

出版日期:2012-10-26 发布日期:2012-10-26
基金资助:
国家自然科学基金项目(30770106),国家自然科学基金重大研究计划面上项目(90608024);;

Published:2012-10-26 Online:2012-10-26

摘要/Abstract

摘要： 大肠杆菌中高效表达携带组氨酸标签的人巨细胞病毒皮层蛋白pUL23,并进行纯化以及鉴定。提取感染HCMVTowne病毒株的HFF细胞的总RNA,逆转录为cDNA作为模板,经PCR获得UL23的基因片段,将此片段插入表达载体pET-28a(+),构建pET28a(+)-UL23重组质粒。将pET28a(+)-UL23转化至大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达。表达产物经Western blotting分析后进行发酵,再用Ni sepharose亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测。结果表明,成功构建pET28a(+)-UL23原核表达载体,表达及纯化了His-pUL23融合蛋白,为进一步研究pUL23奠定基础。

关键词: 人巨细胞病毒, pUL23, 原核表达, 纯化, 组氨酸标签

李婧惠;刘明亮;李继东;张忠明;冉艳红;周天鸿;李弘剑;. 人巨细胞病毒编码蛋白pUL23在E.coliBL21(DE3)中的表达和纯化[J]. .

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