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乳酸乳球菌苹果酸-乳酸酶基因的克隆

董华;刘天明;吴克学;   

  1. 山东轻工业学院,山东轻工业学院,长春金赛药业 济南250100,济南250100,长春130012
  • 出版日期:2006-10-26 发布日期:2006-10-26

  • Published:2006-10-26 Online:2006-10-26

摘要: 用酚抽提的方法提取乳酸乳球菌的基因组DNA,利用PCR方法从乳酸菌的基因组DNA中扩增出含有苹果酸-乳酸酶基因(malolactic enzyme gene,mle)的约1.6kb的DNA片断,用1%的琼脂糖凝胶分离扩增的片断,用试剂盒回收目的基因。将回收的目的基因与pGEM-T载体连接构建mle-T载体并转化大肠杆菌DH5a,挑取阳性克隆(白色菌落),酶切鉴定并测序。SalI酶切mle-T,回收mle DNA片断,与表达载体pET-28a载体连接,构建细菌Escherichia coli表达载体。

关键词: 苹果酸-乳酸酶基因(mle), 克隆, PCR, 测序