利用原生质体融合技术选育淀粉发酵产DHA的新型裂殖壶菌

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.02.012

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (2): 84-90.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.02.012

利用原生质体融合技术选育淀粉发酵产DHA的新型裂殖壶菌

王迪¹, 路福平¹, 王海军¹, 李德茂², 陈树林², 张可²

1. 天津科技大学生物工程学院，天津 300457;
2. 中国科学院天津工业生物技术研究所天津市工业生物系统与过程工程重点实验室，天津 300308

收稿日期:2014-07-28 出版日期:2015-02-05 发布日期:2015-02-06
作者简介:王迪，女，硕士研究生，研究方向：轻工技术与工程（发酵）；E-mail：wangdi0808@hotmail.com
基金资助:
国家“863”计划（2014AA021701），国际合作重点项目（2014DFA61040）

Screening a New Type of Schizochxtrium Strain Producing DHA Using Starch by Protoplast Fusion Technology

Wang Di¹, Lu Fuping¹, Wang Haijun¹, Li Demao², Chen Shulin², Zhang Ke²

1. College of Biotechnology，Tianjin University of Science & Technology，Tianjin 300457;
2. Tianjin Key Laboratory for Industrial Biological Systems and Bioprocessing Engineering，Tianjin Institute of Industrial Biotechnology，Chinese Academy of Sciences，Tianjin 300308

Received:2014-07-28 Published:2015-02-05 Online:2015-02-06

摘要/Abstract

摘要： 以生产DHA的裂殖壶菌（Schizochxtrium）B4D1和黑曲霉（Aspergillus niger）CGMCC 3.316为出发菌株，利用原生质体融合技术选育可以利用淀粉发酵生产DHA的新型裂殖壶菌。用裂解酶制得了两亲本的原生质体，通过研究两亲本培养时间、培养方法、酶解时间等条件对原生质体产量影响的基础上，以PEG介导进行了原生质体的融合，最终确定了原生质体融合最佳条件为40%的 PEG6000，融合温度30℃，融合时间为10 min，在此条件下融合率可达1.9%。通过比较菌落外观、颜色、形态以及分离培养筛选获得了一株利用淀粉裂殖壶菌融合子。经过RAPD验证表明B4D1与CGMCC 3.316发生了重组，融合菌株表达了更多源于B4D1的遗传信息。

关键词: 裂殖壶菌, DHA, 原生质体, 融合, 淀粉

Abstract: Schizochxtrium B4D1 and Aspergillus niger CGMCC 3.316 as original strains, a new strain of Schizochxtrium was selected using starch for producing DHA. The protoplasts from two parents strains were obtained respectively with Lysing enzyme. The study was investigated on the effect of culture time, culture method, enzymolysis time on the protoplasts preparation. Finally, the protoplasts fusion was done under the PEG mediated condition. The optimum condition of protoplast fusion was as follows：PEG6000 concentration of 40%, fusion temperature of 30℃, fusion time of 10 min. Furthermore, the fusion rate reached 1.9% at the optimum condition. Through comparing its colony characteristics, color, morphology and purified spore culture, a new strain has been selected using starch as carbon source. RAPD verification showed that the fusant having integrated genome of B4D1 and CGMCC 3.316 expressed more genetic information from B4D1.

Key words: Schizochytrium, DHA, protoplast, fusion, starch

王迪, 路福平, 王海军, 李德茂, 陈树林, 张可. 利用原生质体融合技术选育淀粉发酵产DHA的新型裂殖壶菌[J]. 生物技术通报, 2015, 31(2): 84-90.

Wang Di, Lu Fuping, Wang Haijun, Li Demao, Chen Shulin, Zhang Ke. Screening a New Type of Schizochxtrium Strain Producing DHA Using Starch by Protoplast Fusion Technology[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(2): 84-90.

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利用原生质体融合技术选育淀粉发酵产DHA的新型裂殖壶菌

Screening a New Type of Schizochxtrium Strain Producing DHA Using Starch by Protoplast Fusion Technology

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