家蝇Thymosin（THY）基因的克隆及原核表达

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.02.021

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (2): 143-147.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.02.021

家蝇Thymosin（THY）基因的克隆及原核表达

王宇^1、2, 吴高吉¹, 罗曼¹, 彭传林¹, 修江帆¹, 尚小丽¹, 吴建伟¹

1.贵阳医学院基础医学院，贵阳 550004;
2.贵州省疾病预防控制中心，贵阳 550004

收稿日期:2014-07-01 出版日期:2015-02-05 发布日期:2015-02-06
作者简介:王宇，男，博士研究生，研究方向：昆虫分子生物学；E-mail：wangzhongyuwy@163.com
基金资助:
国家科技支撑计划（2011BAC06B12），国家自然科学基金项目（81360254）

Cloning and Prokaryotic Expression of Musca domestica Thymosin Gene

Wang Yu^1，2, Wu Gaoji¹, Luo Man¹, Peng Chuanlin¹, Xiu Jiangfan¹, Shang Xiaoli^1,*, Wu Jianwei¹

1. Basic Medical College，Guiyang Medical College，Guiyang 550004;
2. Guizhou Provincial Center for Disease Control Prevention，Guiyang 550004

Received:2014-07-01 Published:2015-02-05 Online:2015-02-06

摘要/Abstract

摘要： 采用EST测序技术从构建的家蝇（Musca domestica）幼虫cDNA质粒文库中筛选到胸腺肽（Thymosin，THY）基因，以该基因的cDNA文库质粒为模板，设计引物，通过PCR扩增，测序鉴定，获得THY基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、信号肽和亚细胞定位等方面进行预测和分析。构建pET-28a（+）-THY重组质粒，转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行诱导表达。研究结果表明，THY基因ORF全长384 bp，编码127个氨基酸，理论分子量14.3 kD，等电点为5.22，具有THY家族的蛋白保守结构域。构建重组原核质粒pET-28a（+）-THY，经IPTG诱导，蛋白在大肠杆菌中获得表达，经亲和层析柱纯化获得目的蛋白，Western blot检测发现纯化的目的蛋白大小正确。

关键词: 家蝇, 胸腺肽, 克隆, 原核表达

Abstract: In order to clone and analyze the prokaryotic expression of thymosin gene from Musca domestica, the thymosin gene which was isolated from Musca domestica cDNA library, was analyzed by the bioinformatics methods in the following aspects, including general physical and chemical properties, signal peptide and subcellular localization. The expression construct pET-28a（+）-THY was preformed. The open reading frame of the thymosin gene was 384 bp that encoded a putative protein with 127 amino acids. The protein with predicted molecular weight 14.3 kD and pI of 5.22, has the conserved thymosin domain that belongs to thymosin family. The result showed that the recombinant prokaryotic expression vector pET-28a （+）-THY was successfully constructed and fusion protein was expressed in E. coli. SDS-PAGE and Western blot analysis indicated that the fusion protein that purified using Ni²⁺ affinity chromatography had the predicted size.

Key words: Musca domestica, thymosin, cloning, prokaryotic expression

王宇, 吴高吉, 罗曼, 彭传林, 修江帆, 尚小丽, 吴建伟. 家蝇Thymosin（THY）基因的克隆及原核表达[J]. 生物技术通报, 2015, 31(2): 143-147.

Wang Yu, Wu Gaoji, Luo Man, Peng Chuanlin, Xiu Jiangfan, Shang Xiaoli, Wu Jianwei. Cloning and Prokaryotic Expression of Musca domestica Thymosin Gene[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(2): 143-147.

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Cloning and Prokaryotic Expression of Musca domestica Thymosin Gene

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