人FGF21原核表达载体的构建及重组蛋白表达

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.04.032

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (3): 218-222.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.04.032

人FGF21原核表达载体的构建及重组蛋白表达

张礼林¹, 唐青蓝², 许庆忠¹, 雷霆雯¹, 李红梅¹

(1. 贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室，贵阳 550004；2. 海南省第三人民医院检验科，三亚 572000)

收稿日期:2014-09-25 出版日期:2015-03-16 发布日期:2015-03-16
作者简介:张礼林，女，硕士研究生，研究方向：基因工程药物；E-mail : 2751628863@qq.com
基金资助:
贵州省科技计划项目资助课题(黔科合LG字[2011]012号)

Preparation of Prokaryotic Expression Construct of Human FGF21 cDNA and Its Recombinant Protein Expression

Zhang Lilin¹ Tang Qinglan² Xu Qingzhong¹ Lei Tingwen¹ Li Hongmei¹

(1. Department of Biochemistry and Molecular Biology，Guiyang Medical College，Guiyang 550004；2. Department of Clinical Laboratory，the Third People’s Hospital of Hainan Province，Sanya 572000)

Received:2014-09-25 Published:2015-03-16 Online:2015-03-16

摘要/Abstract

摘要： 构建人FGF21(fibroblast growth factor，FGF)cDNA的原核表达载体并诱导其重组蛋白表达。提取人肝脏总RNA后，经RT-PCR扩增获得目的片段，构建其T载体进行保存。再构建重组原核表达载体pET-28a(+)-hFGF21，重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21(DE3)中，在IPTG诱导下得到可溶性表达，采用亲和层析法纯化表达产物后，进行Western blot鉴定。成功构建重组质粒pET-28(+)-hFGF21，对其进行可溶性表达后成功纯化出his-hFGF21，经Western blot鉴定该融合蛋白可与FGF21抗体特异性结合。成功构建pET-28(+)-hFGF21，并可溶性表达his-hFGF21蛋白。

关键词: 人成纤维细胞生长因子(FGF21), 克隆, 原核表达, 蛋白纯化

Abstract: Preparation of prokaryotic expression constructs of human FGF21(fibroblast growth factor，FGF)cDNA and induction of recombinant hFGF21 protein expression. Total RNA was extracted from human liver, and the target cDNA fragment was obtained using RT-PCR. The amplified cDNA fragment was cloned into pMD19-T for preservation. Then the expression construct pET-28a(+)-hFGF21 was successfully constructed and expressed with IPTG induction, and the his-hFGF21 protein was purified with histide-selective nickel affinity gel and identified by Western blot. Western blot analysis showed that the fusion protein had specific binding with a FGF21 antibody.

Key words: human FGF21, molecular cloning, prokaryotic expression, protein purification

引用本文

张礼林, 唐青蓝, 许庆忠, 雷霆雯, 李红梅. 人FGF21原核表达载体的构建及重组蛋白表达[J]. 生物技术通报, 2015, 31(3): 218-222.

Zhang Lilin, Tang Qinglan, Xu Qingzhong, Lei Tingwen, Li Hongmei. Preparation of Prokaryotic Expression Construct of Human FGF21 cDNA and Its Recombinant Protein Expression[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(3): 218-222.

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