鸡neurexophilin 1基因在毕赤酵母中的表达

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.04.030

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (3): 213-217.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.04.030

鸡neurexophilin 1基因在毕赤酵母中的表达

陈美玲, 聂彬, 姜勋平, 刘桂琼

(华中农业大学动物科技学院，武汉 430070)

收稿日期:2014-07-07 出版日期:2015-03-16 发布日期:2015-03-16
作者简介:陈美玲，女，硕士研究生，研究方向：动物遗传育种与繁殖；E-mail：chenmeiling064@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(31071088)

Expression of Chicken Neurexophilin 1 Gene in Pichia pastoris

Chen Meiling Nie Bin Jiang Xunping Liu Guiqiong

(College of Animal Science and Technology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070)

Received:2014-07-07 Published:2015-03-16 Online:2015-03-16

摘要/Abstract

摘要： Neurexophilin 1是母鸡子宫阴道结合部位的差异表达基因。根据鸡nxph1的序列，结合毕赤酵母密码子的偏好性，合成nxph1基因，设计引物以合成基因为模板，扩增其去除信号肽的DNA序列△nxph1，将合成的nxph1基因及去除信号肽的nxph1基因片段△nxph1分别插入pPICZαA真核表达载体，构建重组表达质粒pPICZαA/nxph1和去除信号肽的重组表达质粒pPICZαA/△nxph1，电转入毕赤酵母GS115，阳性菌用终浓度为1％的甲醇诱导表达，SDS-PAGE电泳和Western blot检测表达产物，结果表明重组菌成功分泌鸡NXPH1蛋白和去除信号的△NXPH1蛋白，大小约29 kD，为探索NXPH1在母鸡生殖道内的功能奠定基础。

关键词: nxph 1, 毕赤酵母, 基因表达

Abstract: Neurexophilin 1 is the differentially expressed gene at the chicken utero-vaginal junction. According to the mRNA sequence of chicken nxph1 and codon bias of Pichia pastoris, the modified DNA sequence for chicken nxph1 which encodes the same amino acid sequence as that of chicken nxph1were synthesized. Specific primers were designed to amplify part of the synthesized DNA sequence whose expression product has no signal peptide. The two sequences were inserted into pPICZαA vector to construct the recombinant pPICZαA/nxph1 and pPICZαA/△nxph1(without signal peptide), and then the recombinant plasmids were transfected into Pichia pastoris GS115 by electroporation. The positive recombinant strains were inducted to express protein by addition of 1 % methanol. The expression protein was displayed on the Tricine-SDS- PAGE electrophoresis and Western blot. The result showed that chicken NXPH1 protein and △NXPH1 protein were successfully expressed, and the molecular weight of the protein was approximately 29 kD, which provided foundations for analyzing functions of NXPH1 in chicken reproductive tract.

Key words: nxph 1, Pichia pastoris, gene expression

陈美玲, 聂彬, 姜勋平, 刘桂琼. 鸡neurexophilin 1基因在毕赤酵母中的表达[J]. 生物技术通报, 2015, 31(3): 213-217.

Chen Meiling, Nie Bin, Jiang Xunping, Liu Guiqiong. Expression of Chicken Neurexophilin 1 Gene in Pichia pastoris[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(3): 213-217.

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鸡neurexophilin 1基因在毕赤酵母中的表达

Expression of Chicken Neurexophilin 1 Gene in Pichia pastoris

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