农杆菌介导的蓖麻转化体系优化

doi:10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.022

生物技术通报 ›› 2015, Vol. 31 ›› Issue (5): 140-145.doi: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.05.022

农杆菌介导的蓖麻转化体系优化

李伟, 翟羽佳, 李鹏程, 王昌禄

（天津科技大学食品营养与安全教育部重点实验室，天津 300457）

收稿日期:2014-09-23 出版日期:2015-05-18 发布日期:2015-05-18
作者简介:李伟，男，博士，研究方向：植物分子育种；E-mail：skyinmyhear@126.com

Optimization of Agrobacterium-mediated Transformation in Castor(Ricinus communis L.)

Li Wei, Zhai Yujia, Li Pengcheng, Wang Changlu

（Key Laboratory of Food Nutrition and Safety，Tianjin University of Science and Technology，Tianjin 300457）

Received:2014-09-23 Published:2015-05-18 Online:2015-05-18

摘要/Abstract

摘要： 针对影响农杆菌侵染效率的主要因素进行条件优化，确立了以OD₆₀₀为0.8的菌液侵染、预培养5 d后的外植体为最佳侵染条件；侵染外植体经过5 d的共培养并除菌后，转到含有250 mg/L Kan的培养基中进行再生诱导，获得了多株具有Kan抗性的再生植株；通过在共培培养基中添加20 mg/L AS，124 mg/L Na₂S₂O₃和152.4 mg/L DTT，有效地抑制了侵染后外植体的褐化现象，提高了筛选阶段抗性芽的成活率；对具有Kan抗性的再生植株进行PCR和Southern blot验证，共获得18株包含外源基因的阳性转化株。

关键词: 蓖麻, 农杆菌侵染, 转化体系

Abstract: The main factors affecting the efficiency of Agrobacterium infection were optimized, and the optimal infection conditions were 5-day-old pre-cultured explants cultured in bacteria solution with OD₆₀₀ 0. 8. Infected explants after 5 d of co-culture were transferred to medium with 250 mg/L Kan for bud induction and many strains with Kan resistance ability were obtained. By adding 20 mg/L AS, 124mg/L Na₂S₂O₃ and 152. 4 mg/L DTT in the common culture medium, browning phenomenon was effectively inhibited and survival rate of resistant shoots was enhanced. Regenerated plants with resistance to Kan were verified by PCR and Southern blot test. Total 18 positive transformants were obtained.

Key words: Castor（Ricinus comunis L.）, Agrobacterium infection, transformation system

李伟, 翟羽佳, 李鹏程, 王昌禄. 农杆菌介导的蓖麻转化体系优化[J]. 生物技术通报, 2015, 31(5): 140-145.

Li Wei, Zhai Yujia, Li Pengcheng, Wang Changlu. Optimization of Agrobacterium-mediated Transformation in Castor(Ricinus communis L.)[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 31(5): 140-145.

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