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用PCR法直接快速筛查重组阳性克隆

胡维;向华;周艳;刘敬忠   

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  • 出版日期:1999-12-26 发布日期:1999-12-26
  • 基金资助:
    北京自然科学基金

  • Published:1999-12-26 Online:1999-12-26

摘要: 本研究目的是应用PCR法快速筛查插入有苯丙氨酸脱氨酶(PAL)cDNA重组阳性克隆。用于PCR 扩增的引物是位于载体pET23b 启动子处的T7 启动子引物和位于目的基因PALc DNA3′端终止密码TAA 处的引物。以灭菌吸头挑一单菌落加入PCR 体系扩增。结果:在筛查的3 个克隆中,有2 个阳性克隆,并且插入方向正确,经DNA序列测定得到进一步证实。结果表明,以PCR方法筛查重组阳性克隆,可以简便快速鉴定插入片段的大小和方向,不需提取质粒。

关键词: PCR, 基因克隆, 苯丙氨酸脱氨酶