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牙鲆碱性磷酸酶基因5'调控区的克隆及其功能检测

施志仪;顾一峰;陈晓武;胡燕林;   

  1. 上海水产大学生物技术研究中心,上海水产大学生物技术研究中心,上海水产大学生物技术研究中心,上海水产大学生物技术研究中心 上海200090,上海200090,上海200090,上海200090
  • 出版日期:2008-04-26 发布日期:2008-04-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金项目(No.30571420);; 国家教育部博士基金项目(No.20040264001);; 上海市教委重点科研项目资助(No.052252)

  • Published:2008-04-26 Online:2008-04-26

摘要: 通过基因组步移的方法扩增出一段924bp的牙鲆碱性磷酸酶基因5'调控区序列,在线软件分析表明5'调控区内可能含有GKLF、Oct、CREB、E2F、CEBP、GATA-1、Pitx-1、Pit1、RARE/TRE、AP4等转录因子结合位点。采用DNA重组的方法,将克隆得到的5'调控区片段插入启动子缺失的增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-1中,构建重组表达载体pEGFP-JFALP。重组载体瞬时转染COS-7细胞,在倒置荧光显微镜下可以检测到绿色荧光信号,且荧光信号随着时间的延长而增强。结果表明本实验克隆的牙鲆碱性磷酸酶基因5'调控区具有一定的启动子活性,为今后进一步研究碱性磷酸酶基因表达调控的分子机制奠定基础。

关键词: 碱性磷酸酶, 基因, 5'调控区, 克隆, 功能