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结合通用引物快速简便鉴定阳性克隆的PCR方法

崔静;黄爱龙;张文露;   

  1. 重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆医科大学病毒性肝炎研究所感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 重庆400016,重庆400016,重庆400016
  • 出版日期:2008-06-26 发布日期:2008-06-26
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(30600520)

  • Published:2008-06-26 Online:2008-06-26

摘要: 通用引物与载体多克隆位点两端序列互补,将目的片段构建入载体pGEM-T Easy中,利用载体通用引物M13F和M13R结合片段特异引物进行菌液PCR反应。用PCR产物电泳结果来筛选阳性克隆并鉴定目的片段插入方向,同时能有效对短插入片段重组子进行筛选与鉴定。最终以DNA测序结果来验证,与测序结果一致,显示通用引物PCR方法对阳性克隆的筛选和鉴定优于传统酶切和普通PCR鉴定方法,能够弥补传统方法的不足,且简便快速,可作为筛选和鉴定阳性克隆的有效手段。

关键词: 通用引物, PCR, 鉴定, 插入方向, 短插入片段