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重组磷脂酰丝氨酸合成酶的分离纯化及酶学性质研究

张业尼;路福平;李玉;王建玲;   

  1. 天津市工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院;
  • 出版日期:2009-03-26 发布日期:2009-03-26
  • 基金资助:
    天津科技大学科学研究基金项目(20080202);; 国家科技基础平台项目(2005DKA21204-10)

  • Published:2009-03-26 Online:2009-03-26

摘要: 利对重组枯草芽孢杆菌(pBES-pss)表达的磷脂酰丝氨酸合成酶进行分离纯化及酶学性质研究。pBES-pss发酵后的粗酶液经硫酸铵盐析、中空纤维膜除盐浓缩、SP-Sepharose HP离子交换层析和Sephadex G-75凝胶层析,基本获得电泳纯的重组磷脂酰丝氨酸合成酶,比活力可达13.62 U/mg,分子量约为53 kD。酶学性质研究表明,该酶催化卵磷脂水解反应的最适pH8.0,最适温度为35℃。稳定性研究表明:该酶在pH 6.5~9.5区间和低于45℃温度下稳定。表面活性剂及金属离子对该酶水解活性的影响结果表明,SDS、Tween20、Tween80对该酶有抑制作用,Triton X-100对该酶有增强作用;Mg2+、Zn2+、K+对该酶有抑制作用,Ca2+、Mn2+和EDTA对该酶有增强作用。

关键词: 枯草芽孢杆菌, 磷脂酰丝氨酸合成酶, 纯化, 性质