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利用简并引物克隆天山雪莲sikPIP基因片段及RNAi载体的构建

孙辉;祝建波;   

  1. 石河子大学生命科学学院农业生物技术重点实验室;
  • 出版日期:2010-06-26 发布日期:2010-06-26
  • 基金资助:
    国家“863”计划项目(2007AA021401);; 国家转基因重大专项(2008ZX005-004)

  • Published:2010-06-26 Online:2010-06-26

摘要: 利用NCBI、Bloekmaker、CODEHOP、Primer Premier5.0等数据库和生物软件设计简并引物并利用简并引物RT-PCR,首次从天山雪莲中克隆到474bp的PIP基因cDNA片段,命名为sikPIP,其与GenBank中非洲杂交菊PIP基因氨基酸序列的同源性高达93.0%。从上述序列中选取200bp的序列,利用2对同尾酶将正义片段和反义片段插入到植物表达载体CAM2300-35S-Ocs中,成功构建天山雪莲RNAi载体CAM2300-35S-Ocs-sikPIP。为接下来的遗传转化,进一步探明sikPIP基因在天山雪莲中的功能奠定了基础。

关键词: 天山雪莲, sikPIP, 简并引物, RNAi