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利用重组大肠杆菌生产双乙酰

赵宏峰;边英男;黄伟达;   

  1. 复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系;
  • 出版日期:2011-01-26 发布日期:2011-01-26

  • Published:2011-01-26 Online:2011-01-26

摘要: 大肠杆菌自身代谢特征具有发酵生产双乙酰的天然优势。利用PCR技术,以广泛用于双乙酰生产的Lactococcus lactis基因组DNA为模板,克隆得到α-乙酰乳酸合成酶基因α-als,将其构建在表达载体pET-30 a上。与能够高效表达3种大肠杆菌来源HSP 70家族分子伴侣的pKJE 7质粒共同转化E.coli BL21(DE3)。利用目的蛋白质分子伴侣共表达的方法,首次获得了能够高效表达具有酶活力的α-乙酰乳酸合成酶的重组大肠杆菌。在静置培养条件下,能够在该菌株的培养基中检测到双乙酰的生成。融合蛋白酶在温度为30-40℃和pH在6-7之间时具有较高的酶活,以丙酮酸为底物,该酶最适pH为6.8,最适温度为39℃。

关键词: 双乙酰, 乳酸乳球菌, α-乙酰乳酸合成酶, 分子伴侣, 共表达